胚性幹細胞を用いたエリスロポエチン産生細胞の単離

2011 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 21591037
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 腎臓内科学
• 研究機関: 奈良県立医科大学
• 研究代表者: 久保 篤史 奈良県立医科大学, 医学部, 助教 (30316062)
• 研究分担者: 岩野 正之 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (20275324)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• キーワード: ES細胞 / エリスロポエチン / 腎臓

研究概要

1.Epo-EGFP ES細胞の樹立
Epo遺伝子座に相同組み換えによりEGFPを組み込むためにtargeting vectorを作製した。Epo遺伝子のシグナル・ペプチドと開始コドンを削除する形で、EGFP-IRES-puroR遺伝子を組み込む。このベクターをC57BL/6マウス由来のES細胞にエレクトロポレーションすることにより、相同組み換えを行い、Epo遺伝子座にGFPを組み込んだES細胞を樹立した(Epo-EGFP ES細胞)。このES細胞を外胚葉条件、中胚葉条件、内胚葉条件などの様々な培養条件で分化させ、様々な段階でFACSでGFPの解析を行っている。
2.EPO-EGFPマウスの樹立
また、GFPを導入したES細胞をblastcystに注入し、Epo+/-のヘテロ・マウスを作成した。現在、腎臓内でGFPの発現部位を検討することで、in vivoにおいてもEpo産生細胞がどういった局在を示すかについても検討している。

研究成果

• [雑誌論文] Pdx1 and Ngn3 overexpression enhances pancreatic differentiation of mouse ES cell-derived endoderm population (2011)
  • 著者名/発表者名: Kubo A, Stull R, Takeuchi M, Bonham K, Gouon-Evans V, Sho M, Iwano M, Saito Y, Keller G, Snodgrass R
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 6 ページ: e2405
• [雑誌論文] The Homeobox Gene Hex regulates hepatocyte differentiation from embryonic stem cell-derived endoderm (2010)
  • 著者名/発表者名: Kubo A, Kim YH, Irion S, Kasuda S, Takeuchi M, Ohashi K, Iwano M, Dohi Y, Saito Y, Snodgrass R, Keller G
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 51 ページ: 633-641
• [雑誌論文] Possible involvement of stem-like populations with elevated ALDH1 in sarcomas for chemotherapeutic drug resistance (2010)
  • 著者名/発表者名: Honoki K, Fujii H, Kubo A, Kido A, Mori T, Tanaka Y, Tsujiuchi T
  • 雑誌名: Oncol Rep 巻: 24(2) ページ: 501-5
• [雑誌論文] Epithelial-mesenchymal transition as a potential explanation for podocyte depletion in diabetic nephropathy (2009)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi Y, Iwano M, Suzuki D, Nakatani K, Kimura K, Harada K, Kubo A, Akai Y, Toyoda M, Kanauchi M, Neilson EG, Saito Y
  • 雑誌名: Am J Kidney Dis 巻: 54(4) ページ: 653-64
• [雑誌論文] Treatment with recombinant placental growth factor(PlGF) enhances both angiogenesis and arteriogenesis and improves survival after myocardial infarction (2009)
  • 著者名/発表者名: Takeda Y, Uemura S, Iwama H, Imagawa K, Nishida T, Onoue K, Takemoto Y, Soeda T, Okayama S, Somekawa S, Ishigami K, Takaoka M, Kawata H, Kubo A, Horii M, Nakajima T, Saito Y
  • 雑誌名: Circ J 巻: 73(9) ページ: 1674-82
• [学会発表] The Homebox Gene HEX Regulates Hepatocyte Differentiation from ES cell-Derived Endoderm (2010)
  • 著者名/発表者名: Kubo A, Takeuchi M, Kasuda S, Iwano M, Snodgrass R, Keiller G, Saito Y
  • 学会等名: International Symposium on Cardiovascular Endocrinology and Metabolism(CVEM)
  • 発表場所: Nara, Japan
  • 年月日: 20100331-0401
• [学会発表] Stable expression of HIF-1αin tubular epithelial cells promotes interstitial fibrosis (2010)
  • 著者名/発表者名: Kimura K, Iwano M, Yamaguchi Y, Nakatani K, Kubo A, Akai Y, Saito Y
  • 学会等名: International Symposium on Cardiovascular Endocrinology and Metabolism(CVEM)
  • 発表場所: Nara, Japan
  • 年月日: 20100331-0401
• [学会発表] Epithelial-mesenchymal transition as an explanation for podocyte depletion in diabetic nephropathy (2010)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi Y, Iwano M, Suzuki D, Nakatani K, Kimura K, Harada K, Kubo A, Akai Y, Toyoda M, Kanauchi M, Neilson G E, Saito Y
  • 学会等名: International Symposium on Cardiovascular Endocrinology and Metabolism(CVEM)
  • 発表場所: Nara, Japan
  • 年月日: 20100331-0401