| 研究概要 |
生後1-2日の変異型SOD1トランスジェニックマウス(G93ASOD1)あるいは野生型マウスの脊髄からアストロサイト(AST)の初代培養を行った。アストロサイト(G93ASOD1-ASTあるいはWT-AST)単独の培養では細胞の生存率に差は認めなかった。続いてG93ASOD1-ASTあるいはWT-ASTの上に,胎齢12.5日の野生型マウス胎仔脊髄から分離した運動ニューロン(MN)を共培養した。MNはASTと共培養を行うと軸索伸長・シナプス形成とも促進されたが長期の培養ではWT-AST上のMNの生存率が高く軸索の伸長が有意に認められた。続いてそれぞれの共培養からmRNAを抽出した。抽出したmRNAからサブトランクション法によりG93ASOD1-ASTを使用した共培養において発現量が増加するcDNAを134個同定した。これらのcDNAは(1)G93ASOD1-ASTとの相互作用においてMNから産生が増加したcDNA,あるいは(2)G93ASOD1-ASTそのものから産生された,MN性に関与するcDNAである可能性があると考えられた。(1)の可能性について検討するため,in situ hybridization法を用いて,2.5ヶ月令の変異型SOD1トランスジェニックマウス脊髄において候補のcDNAの中から特に脊髄前角MNにおいて発現量の多い遺伝子を探索し,この遺伝子についてトランスジェニックマウスを作成した。マウスはC57BL/6を用い,299個のマウス受精卵に遺伝子を注入し,ファウンダーマウスは25匹産まれた。15匹が1ヶ月令まで生存したため尾からDNAを抽出した。DNAをPCRで解析した結果,5匹のマウスに遺伝子の導入が確認された。
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