| 研究概要 |
今年度は、独自に開発した骨髄内直接移植法を用いて、ヒト臍帯血中に世界で初めて同定した非常に未分化な造血幹細胞(HSC)であるCD34抗原陰性(CD34-)SCID-repopulating cell(SRC)(Blood 101:2924,2003)のさらなる幹細胞特性の解明を行った。昨年度、18種類のlineage(Lin)抗体を用いるCD34-SRCの新たな高度純化法の開発に成功した(Exp Hematol 39:203,2011)。この18Lin-CD34+/-細胞を用いて、各分画を+/-に染め分ける膜表面分子に対する抗体について網羅的な解析を行った。その結果、有望な抗体を2種類同定した。そこで、分子Xに対する抗体を用いて、18Lin-CD34+/-分画を各々X+/-分画に分けてFACSで分取した。各々の分画に含まれる造血幹(前駆)細胞について、1,in vitroコロニー形成法、2,われわれがヒト骨髄由来CD271+SSEA-4+分画より予期的に分離・樹立した間葉系幹細胞(DP MSC)(Blood 116:1575,2010)との共培養系、3,NOGマウスを用いる異種間移植系におけるSRC活性、4,各分画に発現しているHSC/niche関連遺伝子の発現について検討した。その結果、CD34-SRCは、CD34+SRCと比較して、in vitro及びin vivoで異なる分化能を示した。また、CD34-SRCは、in vitro及びin vivoで、従来最も未分化と考えられていたCD34+CD38-CD90+SRCを産生することが明らかになった。以上より、CD34-SRCは、CD34+CD38-CD90+SRCに比べてより未分化な(hierarchy上より上位の)HSCであることが示唆された。
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