C型インフルエンザウイルス感染症の診断法の確立

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21591380
• 研究機関: 山形大学
• 研究代表者: 松嵜 葉子 山形大学, 医学部, 准教授 (00292417)
• キーワード: C型インフルエンザ / 迅速診断法

研究概要

C型インフルエンザウイルスのNP遺伝子分節にプライマーとTaqManプローブを設定したリアルタイムPCR法の評価を小児の臨床検体を用いて行った。MDCK細胞による分離法と比較したところ、感度は100%、特異度98.5%、陽性適中率66.7%、陰性適中率100%だった。細胞培養陽性の検体の平均遺伝子コピー数は3.97×10^8コピー/ml、細胞培養陰性の検体では2.18×10^6コピー/mlで、コピー数に有意な違いを認めた。リアルタイムPCR陽性で細胞培養陰性の検体の88%が10^7コピー/mlよりも少ないことから、本研究で確立したリアルタイムPCR法が、ウイルス量の少ない検体でのC型インフルエンザの診断に有用であることが示された。リアルタイムPCR陽性で細胞培養陰性の検体が本当に陽性であるかどうかを確かめるために、同じ臨床検体を用いてMDCK細胞よりも感度の良い発育鶏卵羊膜腔での感染性ウイルス粒子数の測定を行った。細胞培養陽性の検体の平均感染性粒子数は5.43×10^5EID_<50>/ml、細胞培養陰性の検体は3.67×10^2EID_<50>/mlだった。10^5コピー/mlよりも少ない検体では発育鶏卵での増殖も認めなかった。以上の結果から、臨床検体中のC型インフルエンザの遺伝子コピー数が10^7コピー/ml以上有れば細胞培養での分離ができる十分な感染性ウイルスがあり、10^5/mlよりも少なければ分離できるだけの感染性ウイルスはなく、10^5から10^7/mlの範囲はその中間の感染性ウイルス量になることが判明した。この結果から、コピー数をもとに感染性粒子の数を推測することが可能となり、リアルタイムPCRでC型インフルエンザの診断を行う際の病原ウイルスかどうかの判定や重症度の推測に寄与するものと期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Detection and quantification of influenza C virus in pediatric respiratory specimens by real-time PCR and comparison with infectious viral counts (2012)
  • 著者名/発表者名: Matsuzaki Y, Ikeda T, Abiko C, Aoki Y, Mizuta K, Shimotai Y, Sugawara K, Hongo S
  • 雑誌名: Journal of Clinical Virology 巻: Vol.54 ページ: 130-134
  • 査読あり
• [雑誌論文] Acute respiratory infections due to enterovirus 68 in Yamagata, Japan between 2005 and 2010 (2012)
  • 著者名/発表者名: Ikeda T, Mizuta K, Abiko C, Aoki Y, Itagaki T, Katsushima F, Katsushima Y, Matsuzaki Y, Fuji N, Imamura T, Oshitani H, Noda M, Kimura H, Ahiko T
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 巻: Vol.56 ページ: 139-143
  • DOI: 10.1111/j.1348-0421.2012.00411.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Saffold cardiovirus infection in children associated with respiratory disease and its similarity to coxsackievirus infection (2011)
  • 著者名/発表者名: Itagaki T, Abiko C, Aoki Y, Ikeda T, Mizuta K, Noda M, Kimura H, Matsuzaki Y
  • 雑誌名: Pediatric Infectious Disease Journal 巻: Vol.30 ページ: 680-683
  • 査読あり
• [雑誌論文] Palmitoylation of CM2 is dispensable to influenza C virus replication (2011)
  • 著者名/発表者名: Muraki Y, Okuwa T, Furukawa T, Matsuzaki Y, Sugawara K, Himeda T, Honeo S, Ohara Y
  • 雑誌名: Virus Research 巻: Vol.157 ページ: 99-105
  • 査読あり
• [雑誌論文] ヒトメタニューモウイルス感染症の臨床経過とウイルス排出期間の検討 (2011)
  • 著者名/発表者名: 板垣勉、松嵜葉子
  • 雑誌名: 日本小児科学会雑誌 巻: 115 ページ: 782-787
  • 査読あり
• [学会発表] Antigenic structure of the hemagglutinin of pandemic influenza A(H1N1) virus (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsuzaki Y, Sugawara K, Shimotai Y, Hongo S, Nobusawa E
  • 学会等名: International Union of Microbiological Societies 2011 Congress
  • 発表場所: 札幌市、札幌コンベンションセンター
  • 年月日: 2011-09-13
• [学会発表] リアルタイムPCR法を用いたC型インフルエンザウイルス検出の試み (2011)
  • 著者名/発表者名: 松嵜葉子
  • 学会等名: 第65回日本細菌学会東北支部総会
  • 発表場所: 山形市、山形大学医学部
  • 年月日: 2011-08-18