食道扁平上皮癌におけるSnoNとmiRNAに関する分子生物学的解析

2009 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21591714
• 研究機関: 日本医科大学
• 研究代表者: 宮下 正夫 日本医科大学, 医学部, 教授 (70229847)
• 研究分担者: 瀧澤 俊広 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (90271220) ; 石橋 宰 日本医科大学, 医学部, 講師 (70293214) ; 牧野 浩司 日本医科大学, 医学部, 講師 (30267207) ; 野村 務 日本医科大学, 医学部, 准教授 (60287737) ; 赤城 一郎 日本医科大学, 医学部, 助教 (90552662)
• キーワード: SnoN / miRNA / 食道癌

研究概要

本課題の当該年度における到達目標は、RNAiによるSnoN抑制実験をすべくsiRNAベクターを作成し遺伝子導入することである。まずSnoNにおいてRNAi効果を来たし得る配列の予測しsiRNA発現ベクター中に組み込める制限酵素断端を有する合成DNAを作成した。しかしながら、siRNA発現ベクターであるBLOCK-iT Pol2 miR RNAi Expression Kit (Invitrogen)に上記合成DNAの組み込みを行い(DNA ligation kit ver2.1 : TakaraBIO)形質転換(ヒートショック法:DH5α competent cell : Invitrogen)を行う際に想定内の結果が得られなかったため、クローンベクターを取得の手法が適切かどうかを検討中である。その対策として現在最も汎用されている遺伝子導入試薬であるLipofectamine2000 (Invitrogen)以外の遺伝子導入試薬を用いて同様の実験を進めている。一方、次年度の研究計画である食道扁平上皮癌細胞株でのSnoN抑制実験の準備として、ヒト食道扁平上皮癌細胞株(TE-1、TE-6、OE33、OE21)を購入しSnoN蛋白質の発現を蛍光抗体などを用いて確認するなど、予備実験を進めている。