研究課題
本課題の当該年度における到達目標は、RNAiによるSnoN抑制実験をすべくsiRNAベクターを作成し遺伝子導入することである。まず、食道扁平上皮癌細胞株10種よりRNA、蛋白を抽出し定量的PCR、ウエスタンブロットを施行しSnoN発現の高い細胞株を選択した。次にsnoNにおいてRNAi効果を来たし得る配列の予測しsiRNA発現ベクター中に組み込める制限酵素断端を有する合成DNAを作成した。siRNA発現ベクターであるBLOCK-iT Po 12 mi R RNAi Expression Kit(Invitrogen)に上記合成DNAの組み込みを行い(DNA ligation kit ver2.1:TakaraBIO)形質転換(ヒートショック法:DH5 a competent cell:Invitrogen)を行った。その後、SnoN発現細胞株とそれをknockdownした細胞株においてmiRNAのプロファイリングを比較するために384ウェルフォーマットを用いてmiRNAの網羅的発現解析を行う予定である。一方、食道扁平上皮癌との関連が予測されたmiR21、miR143、miR145、miR205の発現と臨床病理学的因子も合わせて解析した。その結果、我々の研究グループはmiR21とmiR205の発現がリンパ節転移を予測し得ること、さらにmiR143とmiR145の発現と癌の再発との関連を発見しDisease of the Esophagus(2011 in press)に報告した。
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Diseases of the Esophagus
巻: (In press)
