食道扁平上皮癌におけるSnoNとmiRNAに関する分子生物学的解析

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21591714
• 研究機関: 日本医科大学
• 研究代表者: 宮下 正夫 日本医科大学, 医学部, 教授 (70229847)
• 研究分担者: 瀧澤 俊広 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (90271220) ; 石橋 宰 日本医科大学, 医学部, 講師 (70293214) ; 牧野 浩司 日本医科大学, 医学部, 准教授 (30267207) ; 野村 務 日本医科大学, 医学部, 准教授 (60287737) ; 萩原 信敏 日本医科大学, 医学部, 助教 (00328824)
• キーワード: 食道癌 / MicroRNA / SnoN / MiR-720 / MiR-1274A / MiR-1274B / p63 / ADAM9

研究概要

実験計画に従い、食道癌における転写補助因子SnoNの関与を研究するために以下の実験を遂行し実績を得た。
1.食道扁平上皮癌の細胞株(TE-1,TE-8)を用いてRNA干渉(siRNA)によるSnoNの抑制実験を行った。
SnoNの約70%の発現抑制をRNA,タンパクレベルで確認した。
2.発現抑制したRNAを抽出しTaqMan Array Human microRNA A+B Cards set v3.0でmicroRNAアレイ解析を行った。SnoNの抑制により有意に発現値が変動したmicroRNAを3種(miR-720,miR-1274A,miR-1274B)同定した。
3.これらのmicroRNAがターゲットとする遺伝子を探索した。探索方法としてTargetscanによるコンピューター予測や過去の論文で証明されているターゲットタンパクを抽出した。これらによりp63,ADAM9を抽出した。
4.細胞株においてSnoNの強制発現を行い、RNAおよびタンパクレベルでmiRNAの発現値がSnoNの発現と正に相関することも確認した。
5.SnoNをノックダウンし食道癌細胞株にて増殖能を検討したところ、SnoNが増殖を抑制していることが示唆された。