肝虚血再潅流障害に対する分子細胞標的治療法の開発

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21591748
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 田代 裕尊 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (90359894)
• 研究分担者: 木村 康浩 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (80314756)
• キーワード: 肝星細胞 / 肝虚血再潅流障害 / リポソーム / Rhoキナーゼ阻害剤 / ビタミンA

研究概要

Rhoキナーゼ阻害剤を肝星細胞に効率よく運搬する新たなDrug Delivery Systemを作製し、肝虚血再潅流障害の分子・細胞標的治療法を開発することを目的に研究を行い以下の実験結果が得られた。
1.肝星細胞に親和性の高いビタミンAをリガンドとしてRhoキナーゼ阻害剤を内包化したリポソーム体を作製し、その内包化率を液体クロマトグラフィーにより測定し、至適配合比率を決定した。
2.同リポソーム体の肝星細胞への取り込みを確認するため、Rhoキナーゼ阻害剤の代わりにGFPを内包化させ、ラットに同リポソーム体を静注した。肝への取り込みは心・肺・腎などの他臓器に比較し有意に高かった。また、肝星細胞への特異性を確認するため、デスミンによる二重染色で類洞壁に高い特異性を持ってGFPが取り込まれていることを確認した。
3.分離したラット肝星細胞への同リポソーム体の作用を確認するため、collagen gel-contraction assayを用いて検討した。Rho阻害剤単身とリポソーム体で比較すると、同リポソーム体は約100分の1の濃度で非リポソーム体と同程に肝星細胞の収縮を抑制した。
4.ラット虚血再潅流障害モデル(全肝45分阻血)を作製し、同リポソーム体とRho阻害剤単身の効果を比較すると・上記collagengel-cohtractionassayの結果と同様に、同リポソーム体はRho阻害剤単身の約100分の1の投与量で術後3時間のGOT値を同程度に抑制した。
5.ラット虚血再潅流障害モデル(全肝70分阻血)での実験では、未治療群はラットの1週間生存率では0%であったが、Rho阻害剤単身では10mg/kgで100%生存を得られた。一方、同リポソーム体では0.1mg/kgで100%生存が得られた。つぎに同リポソーム体によるRho阻害剤の副作用(低血圧)抑制効果を確認した。Rho阻害剤単身の投与では1mg/kgで体血圧は平均90mmHgから約40mmHgへ低下するも、同リポソーム体ではラット虚血再潅流障害モデルにおける抑制効果が得られた0.1mg/kgでは体血圧は平均90mmHgから約70mmHgへの低下にとどまった。
以上の結果から、Rho阻害剤を内包化したビタミンAリポソーム体は、Rho阻害剤単身の投与に比較し、約100分の1の投与量でラット虚血再潅流障害を改善させることが判明し、さらにRho阻害剤の投与量が少ないことで低血圧などの副作用も軽減することができた。

研究成果

• [雑誌論文] Rho inhibitor prevents ischemia-reperfusion injury in the rat steatotic liver (2012)
  • 著者名/発表者名: Kuroda S, Tashiro H, Igarashi Y, Tanimoto Y, Nambu J, Oshita A, Kobayashi T, Amano H, Tanaka Y, Ohdan H.
  • 雑誌名: J Hepatology 巻: 56 ページ: 146-152
  • 査読あり
• [雑誌論文] Impact of pegylated-interferon therapy on outcomes of patients with hepatitis C virus-related hepatocellular carcinoma after curative hepatic resection (2012)
  • 著者名/発表者名: Tanimoto Y, Tashiro H, Aikata H, Amano H, Oshita A, Kobayashi T, Kuroda K, Tazawa H, Takahashi S, Itamoto T, Chayama K, Ohdan H
  • 雑誌名: Ann Surg Oncol 巻: 19 ページ: 418-425
  • DOI: 10.1245/s10434-011-1866-1
  • 査読あり
• [雑誌論文] No Impact of Perioperative Blood Transfusion on Recurrence of Hepatocellular Garcinoma after Hepatectomy (2012)
  • 著者名/発表者名: Kuroda S, Tashiro H, Kobayashi T, Oshita A, Amano H, Ohdan H
  • 雑誌名: World J Surg 巻: 36 ページ: 651-658
  • DOI: 10.1007/s00268-012-1425-3
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evidence for the immunosuppressive potential of calcineurin inhibitor sparing in liver transplant recipients with impaired renal function (2012)
  • 著者名/発表者名: Ide K, Tanaka Y, Onoe T, Banshodani M, Tazawa H, Igarashi Y, Basnet NB, Doskali M, Tashiro H, Ohdan H
  • 雑誌名: J Transplant 巻: (In press)
  • DOI: 10.1155/2011/483728
  • 査読あり
• [雑誌論文] Achievement of Sustained Viral Response after Switching Treatment from Pegylated Interferon α-2b to α-2a and Ribavirin in Patients with Recurrence of Hepatitis C Virus Genotype 1 Infection after Liver Transplantation (2012)
  • 著者名/発表者名: Kawaoka T, Hiraga N, Takahashi S, Takaki S, Tsuge M, Nagaoki Y, Hashimoto Y, Katamura Y, Miki D, Hiramatsu A, Waki K, Imamura M, Kawakami Y, Aikata H, Ochi H, Tashiro H, Ohdan H, Chayama K
  • 雑誌名: A Case Report. Intervirology 巻: (In press)
  • DOI: 10.1159/000328661
  • 査読あり
• [雑誌論文] A huge metastatic liver tumor from leiomyosarcoma of the inferior vena cava : report of a case (2012)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto M, Kobayashi T, Tashiro H, Amano H, Oshita A, Tanimoto Y, Kuroda S, Tazawa H, Aikata H, Chayama K, Fujii M, Arihiro K, Ohdan H
  • 雑誌名: Surg Today 巻: (In press)
  • DOI: 10.1007/s00595-011-0070-z
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of patients likely to benefit from metastasectomy in stage IV colorectal cancer (2012)
  • 著者名/発表者名: Shimomura M, Okajima M, Hinoi T, Egi H, Takakura Y, Kawaguchi Y, Tokunaga M, Adachi T, Tashiro H, Ohdan H
  • 雑誌名: Int J Colorectal Dis 巻: (In press)
  • DOI: 10.1007/s00384-012-1454-2
  • 査読あり
• [雑誌論文] Optimization of immunosuppressive therapy based on a multiparametric mixed lymphocyte reaction assay reduces infectious complications and mortality in living donor liver transplant recipients (2012)
  • 著者名/発表者名: Tanaka Y, Tashiro H, Onoe T, Ide K, Ishiyama K, Ohdan H
  • 雑誌名: Transplant Proc 巻: 44 ページ: 555-559
  • DOI: 10.1016/j.transproceed.2012.01.038
  • 査読あり
• [雑誌論文] Complex Vascular Reconstruction Using Donor's Vessel Grafts in Orthotopi (2012)
  • 著者名/発表者名: Shimizu S, Onoe T, Ide K, Oshita A, Amano H, Kobayashi T, Tanaka Y, Igarashi Y, Tashiro H, Ohdan H
  • 雑誌名: Transplant Proc 巻: 44 ページ: 574-578
  • DOI: 10.1016/j.transproceeed.2011.12.058
  • 査読あり
• [雑誌論文] IL28B SNP of donors and recipients can predict virological response to PE GIFN/RBV therapy in patients with recurrent hepatitis C after living donor liver transplantation (2012)
  • 著者名/発表者名: Kawaoka T, Takahashi S, Takaki S, Hiramatsu A, Waki K, Hiraga N, Miki D, Tsuge M, Imamura M, Kawakami Y, Aikata H, Ochi H, Onoe T, Tashiro H, Ohdan H, Chayama K
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol 巻: (In press)
  • DOI: 10.1111/j.1440-1746.2012.07129.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Treatment strategy for early hepatocellular carcinomas : Comparison of radiofrequency ablation with or without transcatheter arterial chemoembolization and surgical resection (2011)
  • 著者名/発表者名: Tashiro H, Aikata H, Waki K, Amano H, Oshita H, Kobayashi T, Tanimoto Y, Kuroda S, Tazawa H, Chayama K, AsaharaT, Ohdan H.
  • 雑誌名: J Surg Oncol 巻: 104 ページ: 3-9
  • 査読あり
• [雑誌論文] Splenectomy in chronic hepatic disorders : portal vein thrombosis and improvement of liver function (2011)
  • 著者名/発表者名: Ushitora Y, Tashiro H, Takahashi S, Amano H, Oshita A, Kobayshi T, Chayama K, Ohdan H
  • 雑誌名: Digestive Surgery 巻: 28 ページ: 9-14
  • DOI: 10.1159/000321886
  • 査読あり
• [雑誌論文] Selection Criteria for Hepatectomy in Patients with Hepatocellular Carcinoma Classified as Child-Pugh Class B (2011)
  • 著者名/発表者名: Kuroda S, Tashiro H, Kobayashi T, Oshita A, Amano H, Ohdan H
  • 雑誌名: World J Surg 巻: 35 ページ: 834-841
  • DOI: 10.1007/s00268-010-0929-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] Possibility of adoptive immunotherapy with peripheral blood-derived CD3-CD56+ and CD+CD56+ cells for inducing antihepatocellular carcinoma and antihepatitis C virus activity (2011)
  • 著者名/発表者名: Doskali M, Tanaka Y, Ohira M, Ishiyama K, Tashiro H, Chayama K, Ohdan H
  • 雑誌名: J Immunother 巻: 34 ページ: 129-138
  • DOI: 10.1097/CJI.0b013e3182048c4e
  • 査読あり
• [雑誌論文] Therapeutic potential of propagated hepatocyte transplantation in liver failure (2011)
  • 著者名/発表者名: Amano H, Hino H, Tateno C, Emoto K, Imaoka Y, Yamasaki C, Itamoto T, Tashiro H, Asahara T, Ohdan H, Yoshizato K
  • 雑誌名: J Surg Res 巻: 167 ページ: e29-37
  • DOI: 10.1016/j.jss.2010.12.008
  • 査読あり
• [雑誌論文] Factors relating to tumor do not influence the prognosis of solitary hepatocellular carcinoma after partial hepatectomy (2011)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi T, Itamoto T, Tashiro H, Kuroda S, Tazawa H, Tanimoto Y, Ushitora Y, Oshita A, Amano H, Ohdan H
  • 雑誌名: J HBP science 巻: 18 ページ: 689-699
  • DOI: 10.1007/s00534-011-0379-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] Significance of platelet count in the outcomes of hepatectomized patients with hepatocellular carcinoma exceeding the Milan criteria (2011)
  • 著者名/発表者名: Amano H, Tashiro H, Oshita A, Kobayashi T, Tanimoto Y, Kuroda S, Tazawa H, Itamoto T, Asahara T, Ohdan H
  • 雑誌名: J Gastrointest Surg 巻: 15 ページ: 1173-1181
  • DOI: 10.1007/s11605-011-1538-2
  • 査読あり
• [雑誌論文] Long-term outcome of hepatic artery reconstruction after living-donor liver transplantation (2011)
  • 著者名/発表者名: Banshodani M, Tashiro H, Onoe T, Ide K, Ohdan H
  • 雑誌名: Transplant Proc 巻: 43 ページ: 1720-1742
  • DOI: 10.1016/j.transproceed.2011.03.051
  • 査読あり
• [雑誌論文] Impact of adjuvant immunotherapy using liver allograft-derived lymphocytes on bacteremia in living donor liver trahsplantation (2011)
  • 著者名/発表者名: Tashiro H, Ishiyama K, Ohira M, Igarashi Y, Tahara H, Ide K, Onoe T, Tanaka Y, Ohdan H
  • 雑誌名: Transplantation 巻: 92 ページ: 575-580
  • DOI: 10.1097/TP.0b013e318225db92
  • 査読あり
• [雑誌論文] External Validation of two nomograms for predicting patients survival after hepatic resection for metastatic colorectal cancer (2011)
  • 著者名/発表者名: Takakura Y, Okajima M, Kanemitsu Y, Kuroda S, Egi H, Hinoi T, Tashiro H, Ohdan H
  • 雑誌名: World J Surg 巻: 35 ページ: 2275-2282
  • DOI: 10.1007/s00268-011-1194-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] Kinetics of cellular and humoral immunity in a successful case positive kidney transplantation : a case report (2011)
  • 著者名/発表者名: Tanimine N, Ide K, Yamashita M, Tanaka Y, Igarashi Y, Banshodani M, Tazawa H, Basnet NB, Doskali M, Onoe T, Tashiro H, Ohdan H
  • 雑誌名: Transplant Proc 巻: 43 ページ: 2411-2414
  • DOI: 10.1016/j.transproceed.2011.05.039
  • 査読あり
• [雑誌論文] IL28B polymorphism may guide pegylated interferon plus ribavirin therapy even after curative treatment for hepatitis C virus-related hepatocellular carcinoma (2011)
  • 著者名/発表者名: Kawaoka T, Aikata H, Takaki S, Hiramatsu A, Waki K, Hiraga N, Miki D, Tsuge M, Imamura M, Kawakami Y, Takahashi S, Ochi H, Tashiro H, Ohdan H, Chayama K
  • 雑誌名: J Viral Hepat 巻: 18 ページ: e550-560
  • DOI: 10.1111/j.1365-2893.2011.01468.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Eradication of hepatitis C virus genotype 1 after liver transplantation by interferon therapy before surgery : Report of three patients with analysis of interleukin-28 polymorphism, hepatitis C virus core region and interferon-sensitivity determining region (2011)
  • 著者名/発表者名: Kawaoka T, Aikata H, Miyaki D, Murakami E, Azakami T, Takaki S, Nagaoki Y, Hashimoto Y, Katamura Y, Hiramatsu A, Waki K, Hiraga N, Miki D, Tsuge M, Imamura M, Kawakami Y, Takahashi S, Ochi H, Tashiro H, Ohdan H, Chayama K
  • 雑誌名: Hepatol Res 巻: 41 ページ: 1126-1131
  • DOI: 10.1111/j.1872-034X.2011.00853.x
  • 査読あり
• [学会発表] ドナー由来活性化リンパ球細胞療法による生体肝移植後の敗血症予防 (2011)
  • 著者名/発表者名: 田代裕尊, 茶山一彰, 大段秀樹
  • 学会等名: 第15回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20111020-23
• [学会発表] 生体肝移植における胆管・胆管吻合法と術後胆管狭窄に対する治療 (2011)
  • 著者名/発表者名: 田代裕尊, 天野尋暢, 大下彰彦, 小林剛, 尾上隆司, 石山宏平, 井手健太郎, 佐々木民人, 茶山一彰, 大段秀樹
  • 学会等名: 第29回日本肝移植研究会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 20110722-20110723
• [学会発表] 再肝切除における術後胆汁漏の予防 (2011)
  • 著者名/発表者名: 田代裕尊, 天野尋暢, 大下彰彦, 小林剛, 尾上隆司, 井手健太郎, 大段秀樹
  • 学会等名: 第66回日本消化器外科学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 20110713-0715
• [学会発表] Child-Pugh B原発性肝細胞癌に対する肝切除・肝移植症例の検討 (2011)
  • 著者名/発表者名: 黒田慎太郎, 田代裕尊, 藤國宣明, 楠部潤子, 田澤宏文, 谷本新学, 小林剛, 大下彰彦, 天野尋暢, 番匠谷将孝, 井手健太郎, 尾上隆司, 大段秀樹
  • 学会等名: 第66回日本消化器外科学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-07-13
• [学会発表] 脂肪肝における虚血再潅流障害の機序とその治療法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 黒田慎太郎, 田代裕尊, 五十嵐友香, 谷本新学, 大下彰彦, 小林剛, 天野尋暢, 楠部潤子, 大段秀樹
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-06-02
• [学会発表] C型慢性肝炎関連肝細胞癌切除後のPEG-IFN療法による予後改善効果 (2011)
  • 著者名/発表者名: 田代裕尊, 相方浩, 谷本新学, 天野尋暢, 大下彰彦, 小林剛, 茶山一彰, 大段秀樹
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-06-02