| 研究課題/領域番号 |
21591784
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
石川 朋子 日本医科大学, 医学部, 助教 (70212850)
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| 研究分担者 |
吉田 寛 日本医科大学, 医学部, 准教授 (60246999)
菊池 邦生 日本医科大学, 医学部, 助教 (70374676)
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| キーワード | 外科学 / 肝胆道 / 胆管癌 / microRNA |
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| 研究概要 |
本研究は、新たに見出した胆管上皮特異的microRNA(miRNA)の転写後翻訳調節が肝胆道系疾患(肝内胆管癌、閉塞性黄疸等)関連シグナル伝達経路にどのように関わるのか、機能解析を目指すとともに、miRNAの切り口から肝内胆管系疾患の分子病態の解明と診断のための新規バイオマーカー開発のための基盤研究を目的に研究を行った。1)胆管上皮細胞特異的miRNAの標的mRNAの検証:胆管上皮細胞特異的miRNAの標的mRNAの3'-非翻訳領域をルシフェラーゼ遺伝子のコード領域の下流に挿入したレポータープラスミドを構築し、当該miRNAとともにCOS-7等に導入・培養後、ルシフェラーゼ活性を測定した。ルシフェラーゼアッセイにより、受容体チロシンキナーゼ(RTK)関連分子が標的であることを明らかにした。2)miRNA機能解析:培養肝内胆管癌細胞株に、特異的miRNAを過剰発現させ、RTK→Ras/Raf/MAPKカスカスケードのシグナル分子を、real-time PCRにてmRNAレベルにおける発現変動を解析した。3)閉塞性黄疸に特徴的なmiRNAプロファイル解析:閉塞性黄疸は、さまざまな肝臓疾患において起こる病態であり、マウス閉塞性黄疸モデル(BDLモデル)を用いてmiRNAの発現プロファイル解析を行った。マウス肝臓組織のsmall RNAライブラリーから、総数17,565個のクローンのシークエンス解析に成功した。プロファイル解析から特徴的なmiRNA、13個を見出した。また、胆管上皮細胞特異的miRNAのうち、シークエンス解析においてBDLモデルにのみ発現を認めたmiRNAに関してreal-time PCR法を用いた定量的検証を行ったところ、miR-199aはBDLモデルの肝臓で有意に発現上昇していた。閉塞性黄疸に特徴的なmiRNAをはじめて明らかにすることができた。
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