| 研究概要 |
前年度は小野薬品工業より選択的EP4受容体阻害剤であるONO-AE3-208とONO-AE1-328と提供してもらい、ヒト膠芽腫細胞(U87MG,T98G)に投与して細胞増殖抑制効果をMTT assayで検討した。アラキドン酸刺激下で、これら細胞株は選択的EP4受容体阻害剤2剤とも50～100μM投与下でのみ有意な細胞増殖抑制を認めた。この結果よりin vivoでの実験でも高濃度のEP4受容体阻害剤をマウスに投与する必要があり、毒性を加味する必然性が出てきた。そのため、in vivoの実験は再考する必要があったため、まずin vitroにおけるEP4受容体阻害剤の腫瘍浸潤能抑制効果とアポトーシス誘導効果について検討した。MTT assayと同様に96-well plateに1×10(3)個/wellの両細胞を撒いて70% confluenceになるまで10%FBS含有標準培養液で成長させた。その後薬剤を投与し、無血清培養液下で72時間後に浸潤能と24時間後にアポトーシス誘導効果を調べた。また細胞は薬剤投与時にアラキドン酸で細胞刺激を行った。まずCell Invasion & Detection Assay Kit (Platypus Technologies)を使用して浸潤能抑制効果を検討したところ、両薬剤ともに50μM投与下にて抑制効果が得られた。アポトーシス誘導効果に関しては、In situ apoptosis detection kit (Takara Bio.)とCaspase-3/7 Assay (Promega)を使用した。両薬剤とも50μM投与下において、apoptosis indexの上昇とcaspase-3/7活性化を認めた。またこれら新たな研究結果に過去のデータを加えて12^<th> International Conference on Bioactive Lipids in Cancerにおいて学会発表を行った。
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