| 研究課題/領域番号 |
21591882
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
菅野 秀宣 順天堂大学, 医学部, 准教授 (90265992)
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| 研究分担者 |
中島 円 順天堂大学, 医学部, 助教 (50317450)
新井 一 順天堂大学, 医学部, 教授 (70167229)
西村 欣也 順天堂大学, 医学部, 教授 (80164581)
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| キーワード | 海馬 / 神経細胞新生 / てんかん / パッチクランプ |
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| 研究概要 |
【研究目的】レトロウィルスをベクターとし、神経細胞の新生を促す因子として注目されるPEDFとVEGFの遺伝子導入をてんかんモデルマウスに行う。急性期から慢性期にわたる観察で新生神経細胞が増加しアポトーシスにより脱落しないことを目標にする。
【方法】PEDF,VEGFを導入する前にてんかんマウスでの神経細胞新生を確認した。C57/BLマウスをピロカルピン腹注によるてんかん発作誘発24時間後に、レトロウィルスによりgreen fluorescent protein(GFP)を海馬に導入し、てんかんによって誘発された新生細胞をGFPでマーキングした。てんかん重積後7日(1週)、14日(2週)、28日(4週)に免疫染色を行い、正常神経細胞への成熟度(NeuNの染色性)、apoptosisの割合(ssDNAの染色性)について検討した。GFPでマーキングされた細胞に対し、Patch-clamp法にて発火パターンを直接記録し細胞興奮性を検討した。同様の検討をPEDF,VEGFを導入した群で行った。
【観察結果】てんかん発作により新生細胞はsubgranule zoneに数多く惹起されるが形態も小さく脆弱であり、ほとんどのGFP陽性細胞は成熟過程に入ることなく発作後1週～4週にて消退した。早2期に消失がみられるGFP陽性細胞はssDNAに陰性、NeuN陰性であった。後期にまで残るGFP陽性細胞はssDNA陰性、NeuN陽性であった。発作後1-2週の早期GFP陽性細胞はinputresistances(IR)1.2GΩ-2.0GΩ、resting membrane potential(RMP)は-55mV^-70mVであるのに対し、4週のGFP陽性細胞ではIR300MΩ-1000MΩ、RMP-70~-80mVであった。PEDFおよびVEGFを導入しても、上記の結果に変化はみられなかった。
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