|
IL-32alphaトランスジェニックマウス(Tg)の解析
これまではヒトIL-32alphaのタンパクレベルでの解析が困難であったが、今回commercial baseのELISAを用いて解析したところ、Tgにおいて肝臓・脾臓・膝関節において導入遺伝子由来IL-32alphaの発現をタンパクレベルで確認した。
マウス細胞に対するヒトリコンビナントIL-32alpha(rhIL-32a)の効果の検討
マウスマクロファージのcell lineであるRaw264.7ならびにJ774.1に対しrecombinant IL-32aを添加したところTNFαが誘導されることが確認できた。一方でToll様受容体(TLR)のリガンドであるLPSと共に培養したところ、TNFαの誘導に関してむしろrhIL-32aが抑制的に働くと考えられた。細胞腫によってはIL-32aに対する反応がみられないものもあり、そのいずれもTLRのリガンドに対する反応性が乏しかったため、IL-32の作用にはTLRが関与している可能性が考えられた。
SiRNAの手技を用いた関連分子の検索
TLRシグナルに関連する分子をSiRNAによりノックダウンし、rhIL-32aならびにLPSに対する反応性をみたところ、一部の分子のノックダウンによりrhIL-32aの作用が抑制されたことから、少なくともTLR4のシグナルのどこかにIL-32aの作用点ないしは受容体があるものと推測された。
|
