| 研究概要 |
本研究は,スフェロイドという環境におけるplk2を含む発現が増強された遺伝子群の基礎的解析及び治療への応用展開を図ることが目的である。その中でもPlk2遺伝子に着目し、RNAiを利用して、その発現を抑制することで、前立腺がん細胞株DU145のスフェロイド形成への影響等を含めた同遺伝子の機能解析を目的とした。画像解析にて、siPlk2添加後のスフェロイドの体積はControlに比べて減少した。スフェロイド中心部の面積は有意な変化は認められなかった。siPlk2を添加したスフェロイドの辺縁部は全体に粗となり、境界より細胞が散乱する像を認めた。これらの結果より、細胞増殖帯を中心に表層細胞への影響、特に接着および増殖に影響している可能性が推察された。しかしながら、E-Cadherinやintegrinの発現に変化は認めなかった。siPlk2と抗がん剤ドセタキセル(DTX)を組み合わせた実験では、DTX単剤よりも生存率の減少を認めた。ABC輸送体の発現に関して、MRP2の発現がsiPlk2曝露時に減少することを認めた。また、単層培養で、siPlk2とDTX暴露の各種組み合わせ時で、siPlk2併用時においてSub G 1期(Apoptosis)の増加が確認され,Apoptosisの誘導が確認された。これらの結果より、siPlk2曝露により,細胞増殖やABC輸送体等に複雑に影響している可能性があり,さらなる解析が必要と考えられた。また,単層培養とスフェロイド培養の遺伝子発現比較から抽出された遺伝子群に含まれるSEPTIN6、ACPP、NF1について同様の解析を行った。SEPTIN6およびNF1では,スフェロイド成長の抑制および併用による抗がん剤の効果増強を確認した。ACPPに関しては,併用による抗がん剤の効果増強のみを確認した。
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