研究課題
1.前処理方法の最:適化POCT(Point of Care Testing)でnative蛋白を検出することが目的である。今まで、抗体とCTP蛋白が「非還元状態で」反応するかどうかを検討してきたが、今回は適度な還元処理をおこなう新たな方法を選択した。還元剤として抗原抗体反応阻害しないマイルドな還元剤2-MEAを用いた場合、DTT+ヨードアセトアミド(IAA)を用いた場合の2種類を検討し、エライザ法による検討を行った。その結果、強い還元剤ジチオスレイトール(DTT)を用いてまずサンプルを前処理し、余剰還元力を打ち消す能力があるヨードアセトアミド(IAAを加えてからエライザを行う方法を検討した。その結果、Urea,NP40,DTTを用いた前処理を加えたヒト外リンパとヒト血清の間に十分な反応性の違いが見られた。これはNative CTP検出法の将来を開く画期的な結果である。2.ELISA系の最適化上記の結果を基に、抗CTPペプチド・ポリクローナル抗体12種類を、エライザプレートの固相、捕捉抗体としてそれぞれ使用し、CTPとの反応性をエライザ法で測定する。外リンパと、コントロールの溶血血液を比較して、反応性がもっとも高い組み合わせを検証する。本方法による豚外リンパでのエライザ構築の精度を検討し、ヒトサンプルの検討もおこなった。3.ポジティブコントロールとしてのブタ外リンパの採取現在我々はブタ頭蓋を屠畜場から購入し、手術用顕微鏡を用いて削開し、内耳から外リンパを採取している。現在のところ、モルモットなどの鶴齧類などでも検討を行っている。4.同時並行でCTPの内耳発現特異性に関する分子生物学的研究ラットなどの齧歯類などでも外リンパを採取し、外リンパ内のアイソフォーム発現に関して発生学的な検討をおこないそのユニークな発現パターンを解析した。
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