| 研究課題/領域番号 |
21592295
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
林 礼人 順天堂大学, 医学部, 准教授 (10365645)
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| 研究分担者 |
小室 裕造 順天堂大学, 医学部, 教授 (90306928)
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| キーワード | 神経再生 / 短期的電気刺激 / トランスジェニックマウス / トランスジェニックブタ / Green fluorescent Protein(GFP) / 神経移植 / 神経端側吻合 / 遺伝子改変動物 |
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| 研究概要 |
平成22年度は、神経再生を促進すると報告のある免疫抑制剤FK506を使用した際の神経再生促進作用についてまとめ、報告を行った。
昨年購入することが出来た、神経軸索が蛍光発色するトランスジェニックマウスについて、ようやく繁殖に成功し、具体的に実験で用いることが可能になった。トランスジェニックマウスには、神経軸索が全て発色するThy1-YFP16miceと一部の運動神経が発色するThy1-YFPHmice、それに様々な蛍光色を発色するBrainbow miceが存在するが、Brainbow miceは交配が上手く進まず、まだ使用出来る状況ではない。
その中で、神経軸索が全て蛍光発色するThy1-YFPを使用して実験を行った。短期的電気刺激によって神経再生が促進されるかを評価する為に3つの群を作成した。まず、コントロールとして坐骨神経のCrushのみ行う群。30分刺激群として坐骨神経をCrush後、神経挫滅部より中枢側で30分20Hzの神経刺激を行った群。さらに60分刺激群として、60分間の神経刺激を行なった群を作成した。一週間毎に開創し、神経再生の程度を蛍光顕微鏡下に蛍光発色する軸索伸張や発色程度を観察することで評価した。結果として、神経刺激群よりコントロール群で軸索は速やかに延長し、神経刺激がむしろ神経再生を抑制していると考えられる所見が得られ、諸家の報告と異なる為、今後さらに多角的な評価を行う必要が出てきた。具体的な評価法として、坐骨神経・足背外側皮膚・長母指伸筋を潅流固定の上採取し、共焦点レーザー顕微鏡で再生している神経の詳細を直接的に観察し評価する方法や再生した有髄軸索数をトルイジンブルー染色を行った上でカウントするなどして、総合的な評価を行っていく。
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