歯髄常在性マクロファージの起源と機能解析

2011 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 21592342
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 形態系基礎歯科学
• 研究機関: 昭和大学
• 研究代表者: 中村 雅典 昭和大学, 歯学部, 教授 (50180394)
• 研究分担者: 野中 直子 昭和大学, 歯学部, 助教 (20307052)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• キーワード: 口腔解剖学(含組織学・発生学)マクロファージ / 歯胚 / M-CSF / GM-CSF / 細胞分化

研究概要

未だマクロファージ(Mφ)の分化、機能については議論の的となっており、統一された見解はない。歯髄内において常在性Mφの存在はよく知られているが、その場で増殖・分化するか、或いは血流を介して供給されるかは不明である。本研究では、正常ICRマウスの発生過程における歯髄内常在性Mφの増殖・分化について、in vivoおよび、血流を完全に遮断した器官培養系(in vitro)を用いて解析を行った。
in vivoでは生後0日から生後5日、in vitroは胎生16日下顎第一臼歯歯胚を摘出し14日まで培養を行った。さらに、増殖・分化因子の影響を調べるためM-CSF中和抗体を用いた器官培養も行い、4%パラホルムアルデヒド固定、EDTA脱灰後、凍結包埋を行った。各々の試料は、H-E染色、Mφ抗体であるF4/80、CD68を用いて免疫組織染色を行った。また、in vivoおよび、培養歯胚より実体顕微鏡下で歯乳頭、あるいは歯髄を分離し、Mφの増殖・分化に関する因子の検出のためM-CSFやGM-CSF等のmRNA発現をRT-PCRを用いて検索した。
歯髄内のF4/80+、CD68+Mφ数はin vivoとin vitroで経日的に増加し、両者とも類似した成長曲線を示した。RT-PCR分析では、両者でGM-, G-CSF mRNAの発現は弱かったものの、それぞれの歯乳頭、歯髄よりGM-, G-, M-CSFのmRNA発現が認められた。M-CSF mRNAは最も強く恒常的な発現を示した。M-CSF中和抗体を用いた器官培養系においては歯髄内常在性Mφの増殖抑制を示した。M-CSFは、歯髄常在性マクロファージの発現に対する可能性が高い分子である可能性がある。そして、血清因子は、直接常在性マクロファージの発現に作用する可能性はない。これらの結果より、歯髄常在性Mφは歯髄内で増殖・分化することが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] The role of macrophages for the disappearance of Meckel's cartilage during development in mice (2011)
  • 著者名/発表者名: Tsuzurahara F, Soeta S, Kawawa T, Baba K, Nakamura M
  • 雑誌名: Acta Histochem 巻: 113 ページ: 194-200
• [雑誌論文] Kupffer cells support extramedullary erythropoiesis induced by nitrogen-containing bisphosphonate in splenectomized mice (2011)
  • 著者名/発表者名: Otsuka H, Yagi H, Endo Y, Nonaka N, Nakamura M
  • 雑誌名: Cell Immunol 巻: 271 ページ: 197-204
• [雑誌論文] Roles of platelets and macrophages in the protective effects of lipopolysaccharide against concanavalin A-induced murine hepatitis (2011)
  • 著者名/発表者名: Yu Z, Otsuka H, Yamaguchi K, Kuroishi T, Sasano T, Sugawara S, Nakamura M, Endo Y
  • 雑誌名: Biochim Biophys Acta 巻: 1812 ページ: 1069-1079
• [雑誌論文] In situ proliferation and differentiation of macrophages in dental pulp (2011)
  • 著者名/発表者名: Iwasaki K, Otsuka H, Yanagisawa N, Hisamitsu H, Manabe A, Nonaka N, Nakamura M
  • 雑誌名: Cell Tissue Res 巻: 346 ページ: 99-109
• [雑誌論文] Direct Resorption of Calcified Cartilage by Macrophages during Primary Bone Marrow Cavity Formation (2010)
  • 著者名/発表者名: Murayama T, Endo Y, Kawawa T, Baba K, Nakamura M
  • 雑誌名: Dent Med Res 巻: 30 ページ: 1-8
• [雑誌論文] Localization and Phenotype of Resident Macrophages in the Dental Pulp during Rat Mandibular First Molar Development (2010)
  • 著者名/発表者名: Miyauchi Y, Mayahara M, Sasa R, Inoue M, Nakamura M
  • 雑誌名: Dent Med Res 巻: 30 ページ: 15-21
• [雑誌論文] Morphometrical, Histological and Ultrastructural Analyses of Bone Formation and Resorption Induced by Synthetic Octacalcium Phosphate in Mouse Bone Marrow (2010)
  • 著者名/発表者名: NagaiY, Mayahara M, Suzuki O, Hisamitsu H, Nakamura M
  • 雑誌名: Dent Med Res 巻: 30 ページ: 29-35
• [雑誌論文] Direct Bone Destruction by Neutrophils in Collagen-induced Arthritis Treated with Bisphosphonates (2010)
  • 著者名/発表者名: Nakayama M, Yagi H, Endo Y, Maki K, Nakamura M
  • 雑誌名: Dent Med Res 巻: 30 ページ: 211-218
• [雑誌論文] Macrophages Are Key Cells for the Initiation of Meckel's Cartilage Disappearance (2010)
  • 著者名/発表者名: Tsuzurahara F, Nakamura M
  • 雑誌名: J Oral Biosci 巻: 52 ページ: 150-154
• [雑誌論文] Mitochondrial dysfunction and reduced prostaglandin synthesis in skeletal muscle of Group VIB Ca2+-independent phospholipase A2gamma-deficient mice (2010)
  • 著者名/発表者名: Yoda E, Hachisu K, Taketomi Y, Yoshida K, Nakamura M, Ikeda K, Taguchi R, Nakatani Y, Kuwata H, Murakami M, Kudo I, Hara S
  • 雑誌名: J Lipid Res 巻: 51 ページ: 3003-15
• [雑誌論文] Carbonic anhydrase II regulates differentiation of ameloblasts via intracellular pH-dependent JNK signaling pathway (2010)
  • 著者名/発表者名: Wang X, Suzawa T, Ohtsuka H, Zhao B, Miyamoto Y, Miyauchi T, Nishimura R, Inoue T, Nakamura M, Baba K, Kamijo R
  • 雑誌名: J Cell Physiol 巻: 225 ページ: 709-719
• [雑誌論文] Immunohistochemical comparison of ontogenic development of bone marrow hematopoiesis in two different ossification system (2010)
  • 著者名/発表者名: Ikeda M, Ohtsuka H, Iwasaki Y, Ikeda-Isogai M, Baba K, Nakamura M
  • 雑誌名: Dent Med Res 巻: 30 ページ: 228-236
• [雑誌論文] Morphometric and functional correlation of human neuronal somata : Pyramidal motor, special sensory and general sensory systems (2009)
  • 著者名/発表者名: Shibata M, Goto N, Goto J, Nonaka N, Nakamura M.
  • 雑誌名: Okajima Folia Anat Jpn 巻: 85 ページ: 115-117
• [雑誌論文] Rejection of intradermally injected syngeneic tumor cells from mice by specific elimination of tumor-associated macrophages with liposome-encapsulated dichloromethylene diphosphonate, followed by induction of CD11b(+)/CCR3(-)/Gr-1(-) cells cytotoxic against the tumor cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Takahashi T, Ibata M, Yu Z, Shikama Y, Endo Y, Miyauchi Y, Nakamura M, Tashiro-Yamaji J, Miura-Takeda S, Shimizu T, Okada M, Ueda K, Kubota T, Yoshida R.
  • 雑誌名: Cancer Immunol Immunother 巻: 58 ページ: 2011-2023
• [雑誌論文] Essential mesenchymal role of small GTPase Rac1 in interdigital programmed cell death during limb development (2009)
  • 著者名/発表者名: Suzuki D, Yamada A, Amano T, Yasuhara R, Kimura A, Sakahara M, Tsumaki N, Takeda S, Tamura M, Nakamura M, Wada N, Nohno T, Shiroishi T, Aiba A, Kamijo R.
  • 雑誌名: Dev Biol 巻: 335 ページ: 396-406
• [雑誌論文] Dynamics of platelet mobilization into lungs in response to 5-hydroxytryptamine(serotonin) in mice (2009)
  • 著者名/発表者名: Yu Z, Ohba M, Nakamura M, Sasano T, Ono M, Sugawara S, Endo Y.
  • 雑誌名: Thrombosis and Haemostasis 巻: 102 ページ: 1251-8
• [雑誌論文] Bisphosphonate-related osteonecrosis of the jaw around dental implants in the maxilla : report of a case (2009)
  • 著者名/発表者名: Shirota T, Nakamura A, Matsui Y, Hatori M, Nakamura M, Shintani S
  • 雑誌名: Clin Oral Implants Res 巻: 20 ページ: 1402-8
• [雑誌論文] Osteoclast differentiation induced by synthetic octacalcium phosphate through RANKL expression in osteoblasts (2009)
  • 著者名/発表者名: Takami M, Mochizuki A, Yamada A, Tachi K, Zhao B, Miyamoto Y, Anada T, Honda Y, Inoue T, Nakamura M, Suzuki O, Kamijo R.
  • 雑誌名: Tissue Eng Part A 巻: 15 ページ: 3991-4000
• [雑誌論文] Immunological Characterization of Junctional Epithelium : An Immunohistochemical Study (2009)
  • 著者名/発表者名: Fujioka M, Sasa R, Inoue M, Nakamura M
  • 雑誌名: Dent Med Res 巻: 29 ページ: 253-258
• [学会発表] 成体における神経堤由来細胞の分布とそれを用いた骨芽細胞の分化誘導 (2011)
  • 著者名/発表者名: 小野美樹, 高見正道, 須澤徹夫, 山田篤, 宮内知彦, 馬場一美, 中村雅典, 槇宏太郎, 上條竜太郎
  • 学会等名: 第29回日本骨代謝学会学術集会
  • 年月日: 20110000
• [学会発表] マウス唾液腺におけるPACAPレセプターの局在とPACAPの唾液分泌への効果 (2011)
  • 著者名/発表者名: 野中直子、中村雅典
  • 学会等名: 第53回歯科基礎医学会学術大会・総会
  • 年月日: 20110000
• [学会発表] マウス唾液腺におけるPACAPレセプターおよびVPレセプターの免疫組織化学的局在と唾液分泌への効果 (2011)
  • 著者名/発表者名: 野中直子, 中町智哉, 塩田清二, 中村雅典
  • 学会等名: 第52回日本組織細胞化学会総会・学術集会
  • 年月日: 20110000
• [学会発表] 窒素含有ビスホスホネート投与によって誘導された肝臓内造血について (2011)
  • 著者名/発表者名: 大塚裕忠、中村雅典
  • 学会等名: 第116回日本解剖学会総会・全国学術集会
  • 年月日: 20110000
• [学会発表] 脾臓摘出マウスへの窒素含有ビスホスホネート投与により誘導された髄外造血について (2010)
  • 著者名/発表者名: 大塚裕忠、中村雅典
  • 学会等名: 日本獣医学会総会・学術集会
  • 年月日: 20100000
• [学会発表] III型sPLA2はマスト細胞介在性アナフィラキシーを制御する (2010)
  • 著者名/発表者名: 武富芳隆, 佐藤弘泰, 田中智之, 中村雅典, 上野紀子, 西藤泰昌, 山本圭, 杉本幸彦, 原俊太郎, 村上誠
  • 学会等名: 第83回日本生化学会大会・第33回日本分子生物学会年会合同大会
  • 年月日: 20100000
• [学会発表] マウス唾液腺におけるPACAP、PAC-1レセプターの免疫組織化学的研究 (2010)
  • 著者名/発表者名: 野中直子, 中町智哉, 塩田清二, 中村雅典
  • 学会等名: 第51回日本組織細胞化学会総会・学術集会
  • 年月日: 20100000
• [学会発表] 歯髄内常在性マクロファージの増殖・分化機序 (2010)
  • 著者名/発表者名: 岩崎之克, 柳澤伸彰, 大塚裕忠, 久光久, 真鍋厚史, 中村雅典
  • 学会等名: 第46回口腔組織培養学学術集会
  • 年月日: 20100000
• [学会発表] マウス唾液腺におけるPACAPとPAC-1受容体の免疫組織学的局在 (2010)
  • 著者名/発表者名: 野中直子, 中町智哉, 塩田清二, 中村雅典
  • 学会等名: 第115回日本解剖学会総会・全国学術集会
  • 年月日: 20100000
• [学会発表] 歯髄内常在性マクロファージの増殖・分化機序 (2009)
  • 著者名/発表者名: 岩崎之克, 柳澤伸彰, 大塚裕忠, 久光久, 真鍋厚史, 中村雅典
  • 学会等名: 第51回歯科基礎医学会学術大会・総会
  • 年月日: 20090000
• [学会発表] 造血・リンパ器官形成幹細胞窒素含有ビスホスホネート投与脾臓摘出マウスの肝臓における髄外造血について (2009)
  • 著者名/発表者名: 大塚裕忠、中村雅典
  • 学会等名: 第39回日本免疫学会総会・学術集会
  • 年月日: 20090000
• [学会発表] マウス唾液腺におけるPACAPレセプターの局在とPACAP経鼻投与による唾液分泌量の亢進
  • 著者名/発表者名: 野中直子, 中町智哉, 塩田清二, 中村雅典
  • 学会等名: 第11回日本抗加齢医学会総会
• [図書] 組織学・口腔組織学<第3版> (2010)
  • 著者名/発表者名: 磯川桂太郎・中村雅典・柳澤孝彰・渡邊弘樹
  • 出版者: わかば出版
• [図書] 口腔解剖学 (2009)
  • 著者名/発表者名: 脇田稔・山下靖雄
  • 出版者: 医歯薬出版株式会社