| 研究課題/領域番号 |
21592359
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
服部 高子 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (00228488)
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| 研究分担者 |
滝川 正春 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (20112063)
久保田 聡 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (90221936)
西田 崇 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (30322233)
青山 絵理子 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (10432650)
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| キーワード | 内軟骨性骨形成 / Sox9 / プロテオミクス解析 / ユビキチンリガーゼ / ユビキチン |
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| 研究概要 |
内軟骨性骨形成過程においてSox9は間葉系細胞が軟骨細胞へと分化する方向性を決定する転写制御因子として知られており、分化の段階に応じたマーカー遺伝子の転写を活性化していると考えられ、Sox9の活性の厳密な調節が正常な骨格形成に必要だと思われる。本課題では、Sox9の細胞内量を調節するSox9特異的ユビキチンリガーゼPro-1を同定し、このユビキチンリガーゼによるSox9の細胞内量調節が内軟骨性骨形成に及ぼす影響を調べる事、さらにこのユビキチンリガーゼにおける変異が重篤な神経疾患を引き起こしていることが以前より報告されているため、ユビキチンリガーゼの異常によるSox9の分解不全と神経疾患との関わりについて明らかにすることが最終目的である。今年度は以下の研究成果を得た。
1. Sox9複合体成分のプロテオミクス解析
Sox9の機能を調節する分子を単離する目的で、タグ蛋白のついたSox9を軟骨細胞中に強制発現し、Sox9複合体を精製後プロテオミクス解析することにより、Sox9特異的ユビキチンリガーゼを同定した。
2. ユビキチンリガーゼのSox9への結合、およびユビキチン化促進の確認
同定したユビキチンリガーゼのSox9への結合をin vivo, in vitroで確認した。さらにこのユビキチンリガーゼがSox9のユビキチン化を促進し,Sox9の分解を促進する事をin vitroおよびin vivoのユビキチンアッセイによって確認した。さらにユビキチンリガーゼの過剰発現により、Sox9の転写活性が低下する事をレポータージーンアッセイによって確認した。
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