| 研究課題/領域番号 |
21592435
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| 研究機関 | 日本歯科大学 |
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研究代表者 |
北島 佳代子 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 准教授 (00177841)
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| 研究分担者 |
五十嵐 勝 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 教授 (90168104)
新井 恭子 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 助教 (10434143)
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| キーワード | 歯根膜 / 上皮 / 幹細胞 / 識別マーカー / ヘルトウィッヒ上皮鞘 |
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| 研究概要 |
当大学倫理委員会規定に基づき、対象者の承諾の下に入手されたヒト歯根未完成永久歯の歯頸側1/3、歯根中央1/3、根尖側1/3の歯根表面にある歯根膜組織を各々別々に剔削して細胞を回収した。また別個体から得られた歯根嚢胞壁からも細胞を回収し、それらの細胞をtype IVコラーゲン塗布のBio-Coatフラスコに播種し、3T3細胞をMitomycin処理してfeeder layerとした混合培養で初代培養を行った。上皮細胞と線維芽細胞の三次元再構成培養に用いる目的で、上皮細胞用としてFBSを10%添加したFAD-FBSを、線維芽細胞用として10%FBS添加DMEM液を自家調整し培養液として使用した。初代培養で派生した上皮細胞を継代培養したところ幹細胞様特性を示す上皮細胞が確認されたがその総数は少なく、FACS解析に必要な細胞数を確保することができなかった。そこでブタやサルの歯根膜から採取した細胞を同様に継代したところ、ブタの上皮系細胞から幹細胞様特性を示す細胞が比較的多く出現したため、まずこの細胞のFACS解析を試みることとした。ブタに適合するCD44とCD133の組合せを検討したがFACS用CD133抗体の入手が困難であった。そこで血管内皮細胞を除外するためにまずCD31とCD44を用いてFACS解析し、CD31^-CD44^+分画のside populationを構成する細胞群をsingle cell cloningして分析した後、細胞ならびに三次元再構成培養で得られた組織にCD133の蛍光抗体染色を試みることとし、現在FACS解析中である。歯根膜の3部位から得られた培養細胞の観察から、幹細胞様細胞の発現頻度は部位により差がみられ、FACS解析でもSPの存在が確認されている。ヒト歯根膜ならびに歯根嚢胞からの幹細胞様細胞の回収も継続しており、十分な細胞数が得られ次第順次FACS解析に着手する予定である。
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