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2010 年度 実績報告書

接合上皮細胞の遺伝子発現の網羅的解析と特異的マーカーの検索

研究課題

研究課題/領域番号 21592634
研究機関昭和大学

研究代表者

山本 松男  昭和大学, 歯学部, 教授 (50332896)

研究分担者 山本 剛  昭和大学, 歯学部, 助教 (80384189)
臼井 通彦  昭和大学, 歯学部, 助教 (10453630)
キーワード歯周病 / 網羅的遺伝子解析 / 接合上皮 / レーザーダイセクション
研究概要

本研究の目的は、歯肉粘膜上皮が歯の表面に付着する機構に着目し、それを担う接合上皮細胞の遺伝子発現やタンパク質レベルの特異的マーカーの検索を通して、上皮付着のメカニズムを分子レベルで理解することである。これまで株化細胞は樹立されておらず、形質変化等で容易ではない。レーザーマイクロダイセクション法を応用することで克服する。
7週齢までのJcl : ICRマウス頭部を凍結薄切(前頭断)の後、接合上皮細群をレーザーダイセクション法によって分離する手法を確立した。
凍結切片においても樹脂包埋と同様に硬組織と軟組織の連続性を保った状態で切片を作成し、標的組織である接合上皮および口腔上皮のみを、それぞれレーザーマイクロダイセクション(ML)を用いて回収し、高品質のRNA抽出を行った。さらに、全RNAを抽出・集積し、マイクロアレイによる発現遺伝子の網羅的解析を行った。接合上皮においてCDK(p21, p15)、actin、α-catenin、Slpi、Myl6、Krt-17、Erp29、Anxa1等の発現が接合上皮で上昇していることが確認された。さらに発現量の増加が認められたSlpi(分泌型白血球プロテアーゼインヒビター)は、抗好中球エラスターゼ作用を持つと知られているが、real time PCR法による発現の定量的解析を行ったところ、接合上皮においてSlpiの発現は口腔上皮に比べ約1000倍高いことが明らかとなった。
この特徴的であるSlpiの、タンパク質レベルでの発現を組織切片上で、免疫染色を行い確認したところ、歯の表面に接する接合上皮部位での強陽性細胞が多数確認される一方で、口腔に面する口腔上皮ではほとんど発現が確認されなかった。また、接合上皮に隣接する歯肉線維層の結合組織を形成する歯肉線維芽細胞で陽性を示す細胞が確認された。

  • 研究成果

    (6件)

すべて 2010

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] 歯周病が全身に及ぼす影響2010

    • 著者名/発表者名
      臼井通彦, 山本松男
    • 雑誌名

      月刊糖尿病

      巻: 2巻, 13号 ページ: 15-20

  • [雑誌論文] Comprehensive Analysis of Gene expression in the Junctional Epithelium by Laser Microdissection and Microarray Analysis.2010

    • 著者名/発表者名
      Hayashi Y, Matsunaga T, Yamamoto G, Nishii K, Usui M, Yamamoto M, Tachikawa T
    • 雑誌名

      Journal of Periodontal Research

      巻: 45(5) ページ: 618-625

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Oxidized low-density lipoproteins increases IL-8 production in human gingival epithelial cell line Ca9-22.2010

    • 著者名/発表者名
      Suzuki K, Sakiyama Y, Usui M, Obama T, Kato R, Itabe H, Yamamoto M
    • 雑誌名

      Journal of Periodontal Research

      巻: 45(4) ページ: 488-495

    • 査読あり
  • [雑誌論文] 歯周病と全身疾患リスクは?2010

    • 著者名/発表者名
      臼井通彦, 山本松男
    • 雑誌名

      肥満と糖尿病

      巻: 9(5) ページ: 752-753

  • [学会発表] Oxidized LDL enhances IL-8 production in gingival epithelial cell.2010

    • 著者名/発表者名
      Suzuki K, Sakiyama Y, Nagahama Y, Usui M, Yamamoto M
    • 学会等名
      The 96th Annual Meeting of American Academy of Periodontology in collaboration with the Japanese Society of
    • 発表場所
      Honolulu
    • 年月日
      2010-11-01
  • [学会発表] 超音波照射の歯肉上皮細胞に対する影響について2010

    • 著者名/発表者名
      山本松男, 史春, 臼井通彦, 滝口尚, 菅野真莉加, 野瀬冬樹, 根岸洋一, 富永和宏, 西原達次
    • 学会等名
      日本歯科保存学会2010年度秋季学術大会(第133回)
    • 発表場所
      岐阜
    • 年月日
      2010-10-28

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公開日: 2012-07-19  

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