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2011 年度 実績報告書

RNAメチル基転移酵素による非天然官能基ポスト標識技術の開発と応用

研究課題

研究課題/領域番号 21603018
研究機関独立行政法人理化学研究所

研究代表者

別所 義隆  独立行政法人理化学研究所, 機能解析第2研究チーム, チームリーダー (70242815)

キーワード生物・生体工学 / バイオテクノロジー / 酵素反応 / タンパク質 / メチル基転位酵素 / tRNA / 人工補酵素 / S-アデノシルメチオニン
研究概要

メチル基転移酵素の多くは、S-adenosyl-L-methionine(AdoMet)を補酵素として、核酸、糖、タンパク質など、生体高分子の様々な部位を修飾する。tRNA分子の成熟化において、メチル基転移修飾は最も基本的な必須の酵素反応であり、基質tRNAの塩基特異的に非常に多くの酵素が存在する。研究代表者は、tRNAメチル基転移酵素と人工補酵素のAdoMet類似体を用いて、メチル基以外の非天然官能基がtRNA分子に高効率で取り込まれることを確認した。今年度、特定の短鎖リンカーを結合させたAdoMet類似体を新たに有機化学合成し、tRNAのセントラルコア領域26位のグアノシンを修飾する古細菌型Trm1メチル基転移酵素が、新たな非天然官能基をtRNA基質に直接に取り込むことを確認した。非天然官能基末端を蛍光標識することで、tRNA基質の均一な蛍光標識試料を準備し、tRNA・タンパク質複合体の蛍光結晶を作成した。大型放射光SPring-8のマイクロビームBL32XUビームラインにて、レーザー照射により結晶からの蛍光発色の観測に成功し、微小結晶X線回折測定法の開発に目途を付けた。また、人工官能基を転移出来るメチル基転移酵素の種類数を増やすため、新たに真正細菌型Trm1メチル基転移酵素と大腸菌MnmCメチル基転移酵素の結晶も作成しX線結晶構造解析に成功した。結晶構造モデルから、メチル基転位酵素の触媒ポケットにて、人工官能基がどのように立体障害を避けているか分析し、特定の転移効率の低い酵素において変異体デザインの最適化法を見出した。

  • 研究成果

    (7件)

すべて 2011

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (5件)

  • [雑誌論文] Substrate tRNA recognition mechanism of a multisite-specific tRNA methyltransferase, Aquifex aeolicus Trm1, based on the X-ray crystal structure2011

    • 著者名/発表者名
      Awai T., et al
    • 雑誌名

      J Biol Chem

      巻: 286 ページ: 35236-35246

    • DOI

      10.1074/jbc.M111.253641

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Crystal structure of the bifunctional tRNA modification enzyme MnmC from Escherichia coli2011

    • 著者名/発表者名
      Kitamura A., et al
    • 雑誌名

      Protein Sci

      巻: 20 ページ: 1105-1113

    • DOI

      10.1002/pro.659

    • 査読あり
  • [学会発表] SPring-8/XFELの新しい光に期待するタンパク質生合成システム・分子イメージング手法の開発2011

    • 著者名/発表者名
      別所義隆
    • 学会等名
      第4回アストロバイオロジーワークショップ
    • 発表場所
      神戸大学(神戸市)
    • 年月日
      2011-11-27
  • [学会発表] 原始生命における核酸修飾と遺伝暗号2011

    • 著者名/発表者名
      別所義隆
    • 学会等名
      第84回日本生化学会大会、シンポジウム1S2p「生命システム原材料の起源と進化」
    • 発表場所
      国立京都国際会館(京都市)(招待)
    • 年月日
      2011-09-21
  • [学会発表] Multisite specific tRNA methyltransferase Trm1 from a hyper-thermophilic eubacterium, Aquifex aeolicus2011

    • 著者名/発表者名
      Awai T., et al
    • 学会等名
      Thermophiles 2011
    • 発表場所
      Big Sky, Montana USA
    • 年月日
      2011-09-11
  • [学会発表] SPring-8/XFELの新しい光に期待する古細菌RNA/RNP分子イメージング手法の開発2011

    • 著者名/発表者名
      別所義隆
    • 学会等名
      第24回日本Archaea研究会講演会
    • 発表場所
      慶應義塾大学先端生命科学研究所(鶴岡市)
    • 年月日
      2011-09-03
  • [学会発表] Crystal structure of the bifunctional tRNA modification enzyme MnmC2011

    • 著者名/発表者名
      Kitamura A., et al
    • 学会等名
      16th Annual meeting of the RNA society (RNA2011)
    • 発表場所
      国立京都国際会館(京都市)
    • 年月日
      2011-06-16

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公開日: 2013-06-26  

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