| 研究概要 |
Trichoderma reeseiは、セルラーゼ高生産菌として知られている。しかしながら、β-グルコシダーゼ(BGL)活性が他のセルラーゼ活性に比べて低く、セルロースの完全糖化のためには、T.reeseiセルラーゼにBGLを添加する必要があることが判明している。T.reeseiがセルロース培養時に発現するBGL 3種(Cel1A,Cel3A,Cel3C)の生理的役割を明らかにすることで、T.reeseiのセルラーゼ生産能力の向上及びT.reeseiセルラーゼの糖化能力の向上のための知見を得ることが本研究の目的である。
1. 各酵素の酵素学的性質を明らかにするため、異種宿主での発現を試みた。Cel1A及びCel3Aは、平成20年度までに大腸菌を宿主として発現させ酵素学的性質を明らかにしてきた。Cel3Cの異種宿主発現は、Schizosaccharomyces pombe及びSaccharomyces cerevisiaeを宿主として試みたが発現量が低く精製及び酵素学的性質の解明まで至らなかった。現在Pichia pastorisを宿主としてHis-tag精製可能な組換えCel3Cの発現を試みている。発現確認後、組換え酵素を精製し、酵素学的性質を明らかにする予定である。
2. 各酵素のT.reesei破壊株を作成し、それぞれの破壊株のセルロース代謝及びセロビオース代謝を調べることにより、各酵素の生理的役割を明らかにしようとしている。平成22年度は、3種BGL遺伝子破壊用ベクターを作成し、各ベクターを用いてT.reeseiを形質転換した。現在、各酵素遺伝子の破壊を確認している。2種BGL遺伝子破壊株の作成も同様に行う予定である。
|
