核移植によるノックアウトウサギ病態モデルの作製及び動脈硬化研究への応用

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21659078
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 範 江林 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 教授 (60272192)
• 研究分担者: 小池 智也 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 助教 (40432158)
• キーワード: ノックアウト / 遺伝子導入 / クローン / ウサギ / 動脈硬化モデル / 高脂血症 / トランスジェニック

研究概要

本年度ではすでにノックアウトマウスやラットなどで成功した新しい技術としてZinc Finger Nuclease(ZFN)法を改良し、ノックアウトウサギの作製に応用させることを目指した。昨年度に作製した三つのウサギCETP遺伝子部位(エクソン3、エクソン8、エクソン2)を変異させるZFNクローニングベクターを設計した。これらのベクターを用いて、ウサギの受精卵へのマイクロインジェクションを行い、ウサギCETP遺伝子を欠損させる可能性と成功率の比較を行った。検討の結果、3個のうち、Set1ベクターはウサギCETP遺伝子を欠損させる確率が一番高く、遺伝子Targetベクターとして使用できると判断した。今後、Set1ベクターを用いて、引き続いてマイクロインジェクションを行うことにした。
また、実験ツールとしてのクローンウサギ技術の簡易化並びに実用化を推進するために、ヒト家族性高脂血症モデルであるWHHLウサギの(妊娠2週間)胎児から分離した皮膚線維芽細胞を用いて、核移植によるクローンウサギの作製を5回行った。しかし、今回仮親ウサギは、出産せず、WHHLクローンウサギの誕生には至らなかった。その原因としては、培養条件下でWHHLウサギの胎児線維芽細胞の増殖能は通常のJWウサギより遅いことが考えられる。今後、本研究室で作製されたヒトアポ蛋白AII遺伝子導入ウサギの線維芽細胞を用いたクローンウサギ作製も試みる予定である。
更にレンチウイルスRNAi技術を用いて、ノックダウンウサギの作製にも挑戦した。その結果、ノックダウンウサギのF1血漿CETP蛋白濃度が約50%、正常ウサギより低値であった。今後、この技術を用いてノックダウンウサギの作製が可能かどうかを検討することにした。

研究成果

• [雑誌論文] Endothelial lipase mediates hdl levels in normal and hyperlipidemic rabbits (2012)
  • 著者名/発表者名: Zhang J, Yu Y, Nakamura K, Koike T, Waqar AB, Zhang X, Liu E, Nishijima K, Kitajima S, Shiomi M, Qi Z, Yu J, Graham MJ, Crooke RM, Ishida T, Hirata K, Hurt-Camejo E, Chen YE, Fan J
  • 雑誌名: J Atheroscler Thromb 巻: 19 ページ: 213-226
  • 査読あり
• [雑誌論文] C-reactive protein is associated with the progression of acute embolic stroke in rabbit model (2012)
  • 著者名/発表者名: Yu Q, Lin Y, Yang P, Wang Y, Zhao S, Yang P, Fan J, Liu E
  • 雑誌名: J Thromb Thrombolysis 巻: 33 ページ: 301-307
  • 査読あり
• [雑誌論文] C-reactive protein levels are associated with the progression of atherosclerotic lesions in rabbits (2012)
  • 著者名/発表者名: Yu Q, et al
  • 雑誌名: Histol Histopatol 巻: 27 ページ: 529-535
  • DOI: PMID:22374730
  • 査読あり
• [雑誌論文] High-dose rosiglitazone is pro-atherogenic in cholesterol-fed rabbits (2012)
  • 著者名/発表者名: Wang Y, et al
  • 雑誌名: Atherosclerosis 巻: 222 ページ: 292-294
  • DOI: DOI:10.1016/j.atherosclerosis.2012.01.048
  • 査読あり
• [雑誌論文] Temporal and quantitative analysis of atherosclerotic lesions in diet-induced hypercholesterolemic rabbits (2012)
  • 著者名/発表者名: Yu Q, et al
  • 雑誌名: J Biomed Biotechnol 巻: 2012 ページ: Article ID 506159(7 pages)
  • DOI: DOI:10.1155/2012/506159
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effects of human c-reactive protein on pathogenesis of features of the metabolic syndrome (2011)
  • 著者名/発表者名: Pravenec M, Kajiya T, Zidek V, Landa V, Mlejnek P, Simakova M, Silhavy J, Malinska H, Oliyarnyk O, Kazdova L, Fan J, Wang J, Kurtz TW
  • 雑誌名: Hypertension 巻: 57 ページ: 731-737
  • 査読あり
• [雑誌論文] Human c-reactive protein enhances thrombus formation after neointimal balloon injury in transgenic rabbits (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsuda S, Yamashita A, Sato Y, Kitajima S, Koike T, Sugita C, Moriguchi-Goto S, Hatakeyama K, Takahashi M, Koshimoto C, Matsuura Y, Iwakiri T, Chen YE, Fan J, Asada Y
  • 雑誌名: J Thromb Haemost 巻: 9 ページ: 201-208
  • 査読あり
• [雑誌論文] Perfluorooctane sulfonate impairs the cardiac development of a marine medaka (oryzias melastigma) (2011)
  • 著者名/発表者名: Huang Q, et al
  • 雑誌名: Aquat Toxicol 巻: 105 ページ: 71-77
  • DOI: DOI:10.1016/j.aquatox.2011.05.012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hypertriglyceridemia and delayed clearance of fat load in transgenic rabbits expressing human apolipoprotein CIII (2011)
  • 著者名/発表者名: Ding Y, et al
  • 雑誌名: Transgenic Res 巻: 20 ページ: 867-875
  • DOI: DOI:10.1007/s11248-010-9467-5
  • 査読あり
• [学会発表] ApoAII-rich HDLs have anti-inflammatory functions (2012)
  • 著者名/発表者名: Koike T
  • 学会等名: XVI International Symposium on Atherosclerosis
  • 発表場所: Sydney Convention and Exhibition Centre (Sydney)
  • 年月日: 2012-03-26
• [学会発表] The anti-atherogenic effects of probucol and cilostazol in cholesterol-fed rabbits (2012)
  • 著者名/発表者名: Liu E
  • 学会等名: XVI International Symposium on Atherosclerosis
  • 発表場所: Sydney Convention and Exhibition Centre (Sydney)
  • 年月日: 2012-03-26
• [学会発表] Probucol has different anti-atherogenic effects compared to atorvastatin (2011)
  • 著者名/発表者名: Niimi M
  • 学会等名: 第43回日本動脈硬化学会総会・学術集会
  • 発表場所: ロイトン札幌(札幌市)
  • 年月日: 2011-07-16
• [学会発表] Hypertriglyceridemia and delayed clearance of fat load in transgenic mice, rabbits and minipigs expressing human Apo CIII (2011)
  • 著者名/発表者名: Liu G
  • 学会等名: 第43回日本動脈硬化学会総会・学術集会
  • 発表場所: ロイトン札幌(札幌市)
  • 年月日: 2011-07-15
• [学会発表] Apolipoprotein-AII plays an important role in lipid metabolism and atherosclerosis (2011)
  • 著者名/発表者名: Koike T
  • 学会等名: 第43回日本動脈硬化学会総会・学術集会
  • 発表場所: Hungarian Academy of Sciences (Budapest)
  • 年月日: 2011-06-30
• [備考]
  • URL: http://www.med.yamanashi.ac.jp/clinical_basic/pathol01/