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2009 年度 実績報告書

RNA干渉技術を駆使してアポトーシス誘導シグナルを増強した遺伝子治療法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 21659323
研究機関札幌医科大学

研究代表者

時野 隆至  札幌医科大学, 医学部, 教授 (40202197)

研究分担者 古畑 智久  札幌医科大学, 医学部, 准教授 (80359992)
キーワード癌 / 遺伝子 / トランスレーションリサーチ
研究概要

p53遺伝子治療は新しい癌治療戦略として期待されているが、p53抵抗性腫瘍など克服すべき点も多く、根治を目指した治療に至っていない。p53ネットワーク・パスウェイを理論的な裏付けとして、合理的に癌抑制遺伝子p53のアポトーシス誘導能を増強し、革新的な高性能遺伝子治療ベクターを開発することを目的とする。
p53の標的遺伝子のうちアポトーシス抑制に作用するものは、細胞周期停止に関与する遺伝子が多い。そこで、そのような遺伝子の中からp21遺伝子を選択し、これを特異的にノックダウンするため、p21特異的な人工microRNA(miR-p21)を設計した。この配列をもとにmiR-p21発現プラスミドベクターを構築し、p53導入によるp21発現誘導が特異的に抑制できることを確認した。
次に、p53タンパク発現ベクターとp21抑制性miRNA発現ベクターをひとつにハイブリッドしたプラスミドベクターを構築した。この単一プラスミドベクターをHEK293細胞株や大腸癌細胞株に遺伝子導入したところ、p53タンパクは強く発現されたが、一方、p21タンパクの発現誘導は抑制された。さらに、このプラスミドベクターをもとにp53タンパクとp21抑制性miRNAを共発現するアデノウイルスベクター(Ad-p53/miR-p21)を構築した。大腸癌細胞株DLD1および肝癌細胞株HLF、Hep3Bに感染させ、フローサイトメトリーにてDNA量を測定したところ、p53単独発現のベクター(Ad-p53)と比較して有意にアポトーシスを示すsubG1の増加を認めた。また、大腸癌細胞株SW480では、抗癌剤アドリアマイシンを併用することにより、p53単独ベクター(Ad-p53)と比較してp21抑制性miRNA/p53共発現ベクター(Ad-p53/miR-p21)導入で強くアポトーシスが誘導された。

  • 研究成果

    (17件)

すべて 2010 2009 その他

すべて 雑誌論文 (10件) (うち査読あり 10件) 学会発表 (6件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Genomic screening for genes upregulated by demethylation revealed novel targets of epigenetic silencing in breast cancer2010

    • 著者名/発表者名
      Fujikane, Tomoko, et al
    • 雑誌名

      Breast Cancer Res Treat (in press)

    • 査読あり
  • [雑誌論文] IGFBP7 is a p53 responsive gene specifically silenced in colorectal cancer with CpG island methylator phenotype2010

    • 著者名/発表者名
      Suzuki, Hiromu, et al
    • 雑誌名

      Carcinigenesis VOL.31

      ページ: 342-349

    • 査読あり
  • [雑誌論文] p53 family members regulate the expression of the apolipoprotein D gene2009

    • 著者名/発表者名
      Sasaki, Yasushi, et al
    • 雑誌名

      J Biological Chemistry VOL.284

      ページ: 872-883

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A single recombinant adenovirus expressing p53 and p21-targeting artificial microRNAs efficiently induces apoptosis in human cancer cells2009

    • 著者名/発表者名
      Idogawa, Masashi, et al
    • 雑誌名

      Clinical Cancer Res VOL.15

      ページ: 3725-3732

    • 査読あり
  • [雑誌論文] CHFR, a potential tumor suppressor, downregulates interleukin-8 via inhibition of NF-kB2009

    • 著者名/発表者名
      Kashima, Lisa, et al
    • 雑誌名

      Oncogene VOL.28

      ページ: 2643-2653

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A novel method, digital genome scanning detects KRAS gene amplification in gastric cancers : involvement of overexpressed wild-type KRAS in downstream signaling and cancer cell growth2009

    • 著者名/発表者名
      Mita, Hiroaki, et al
    • 雑誌名

      BMC Cancer VOL.9

      ページ: 198(Online)

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A novel biomarker for cervical cancer2009

    • 著者名/発表者名
      Tokino, Takashi
    • 雑誌名

      Cancer Biology Therapy VOL.8

      ページ: 1154-1155

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Genomic Screening for genes silenced by DNA methylation revealed an association between RASD1 inactivation and dexamethasone resistence in multiple myeloma2009

    • 著者名/発表者名
      Nojima, Masanori, et al
    • 雑誌名

      Clinical Cancer Res VOL.15

      ページ: 4356-4364

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Cancer epigenomics : Implications of DNA methylation in personalized cancer therapy2009

    • 著者名/発表者名
      Toyota, Minoru, et al
    • 雑誌名

      Cancer Science VOL.100

      ページ: 787-791

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Overexpression of Aurora A by loss of CHFR gene expression increases the growth and survival of HTLV-1-infected T cells through enhanced NF-kappaB activity2009

    • 著者名/発表者名
      Tomita, Mariko, et al
    • 雑誌名

      Int J Cancer VOL.124

      ページ: 2607-2615

    • 査読あり
  • [学会発表] A single adenovirus expressing p53 protein and p21-targeting artificial microRNAs improves therapeutic outcome in cancer2010

    • 著者名/発表者名
      Tokino, Takashi
    • 学会等名
      8th Joint Conference of AACR and JCA
    • 発表場所
      Hilton Waikoloa Village(米国)
    • 年月日
      2010-02-09
  • [学会発表] CHFR, a potential tumor suppressor, downregulates interleukin-8 via inhibition of NF-kB2010

    • 著者名/発表者名
      Kashima, Lisa, et al
    • 学会等名
      8th Joint Conference of AACR and JCA
    • 発表場所
      Hilton Waikoloa Village(米国)
    • 年月日
      2010-02-08
  • [学会発表] hCLCA2, a p53 inducible transmembrane protein, regulates cancer cell migration and adhesion2010

    • 著者名/発表者名
      Sasaki, Yasushi, et al
    • 学会等名
      8th Joint Conference of AACR and JCA
    • 発表場所
      Hilton Waikoloa Village(米国)
    • 年月日
      2010-02-07
  • [学会発表] Identification and characterization of early growth response gene-2 as a p53-regulated proapoptotic gene2010

    • 著者名/発表者名
      Yokota, Ikuko, et al
    • 学会等名
      8th Joint Conference of AACR and JCA
    • 発表場所
      Hilton Waikoloa Village(米国)
    • 年月日
      2010-02-07
  • [学会発表] p53 family members regulate the expression of the apolipoprotein D gene2009

    • 著者名/発表者名
      Sasaki, Yasushi, et al
    • 学会等名
      米国癌学会年会
    • 発表場所
      Colorado Convention Center(米国)
    • 年月日
      2009-04-21
  • [学会発表] A single recombinant adenovirus expressing p53 and p21-targeting artificial microRNAs efficiently induces apoptosis in human cancer cells2009

    • 著者名/発表者名
      Idogawa Masashi, et al
    • 学会等名
      米国癌学会年会
    • 発表場所
      Colorado Convention Center(米国)
    • 年月日
      2009-04-21
  • [備考]

    • URL

      http://web.sapmed.ac.jp/canmol/index.html

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公開日: 2011-06-16   更新日: 2016-04-21  

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