不死化能獲得に関与するp53安定化シグナルの解明とその再構築による癌ゲノム創薬

2009 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21659385
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 和氣 徳夫 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (60091584)
• 研究分担者: 小林 裕明 九州大学, 大学院・医学研究院, 准教授 (70260700) ; 谷口 秀一 九州大学, 大学病院, 助教 (70452711) ; 井上 貴史 九州大学, 大学病院, 助教 (70380417)
• キーワード: がん細胞老化 / MDM2 / ROS / p53 / p21

研究概要

本研究では細胞老化プログラムに関与するRas/ERα/p53/p21シグナル伝達路の生物学的意義を明らかにするため、本シグナル伝達路が破錠しているがん細胞株にp21 CDK inhibitorを遺伝子導入し表現型の変化を解析した。p21F(全長)、p21N(pCNA結合領域欠失)及びp21C(CDK結合領域欠失)をアデノウイルス-ベクターを用いて導入したところ、p21F及びp21Cにがん細胞老化誘導を確認した。以上からCDK結合領域にp21による細胞老化誘導能が存在することが判明した。ウイルス感染量を増大すると野生型p53遺伝子を保有する細胞ではアポトーシスによる細胞死が誘導された。細胞死の誘導とともにReactive Oxigen Species(ROS)が産生された。細胞老化に比しアポトーシスでは高いレベルのROSが産生された。NACを用いROS産生を阻害すると細胞死は回避できた。これらの結果からROS産生レベルが細胞死のタイプを決定していることが示唆された。ROS産生に伴い、p53発現レベルは亢進した。si RNAを用いてp53蛋白発現を抑制すると細胞死は回避された。
さらに卵巣癌及び子宮体癌細胞におけるMDM2蛋白発現の制御による細胞死の誘導について検討した。Sp阻害剤であるMithramycinを用いた。これらがん細胞ではMDM2蛋白の高発現を認めたが、Mithramycinは低濃度でもMDM2蛋白発現を抑制した。これにより一時的なp53蛋白の安定化が導かれた。しかしMithramycin投与12h後からp53蛋白の安定化による機能亢進に伴いMDM2蛋白の発現誘導が観察された。誘導されたMDM2は核移行し、MDMX発現も制御していたため活性化型であった。Mithramycinは高濃度で造腫瘍能を抑制し、低濃度では造腫瘍能を抑制しなかった。MDM2機能阻害剤Nutlin3の併用により低濃度Mithramvcinによる顕著ながん細胞死の誘導が確認された。

研究成果

• [雑誌論文] Coincident expression of beta-catenin and cyclin D1 in endometrial stromal tumors and related high-grade sarcomas (2010)
  • 著者名/発表者名: Kurihara S, Oda, Y, Ohishi, Y, Kaneki E, Kobayashi H, Wake N, Tsuneyoshi M
  • 雑誌名: Mod Pathol 23(2) ページ: 225-34
• [雑誌論文] The Phenotypic and Metabolic of Characteristics of Neutrophils in Normal Pregnancy and Preeclampsia (2009)
  • 著者名/発表者名: Tsukimori K, Fukushima K, Nakano H, Wake N
  • 雑誌名: Current immunology reviews 5(3) ページ: 243-248
• [雑誌論文] Improvement in the outcome of patients with antenatally diagnosed congenital diaphragmatic hernia using gentle ventilation and circulatory stabilization (2009)
  • 著者名/発表者名: Masumoto K, Teshiba R, Esumi G, Nagata K, Takahata Y, Hikino S, Hara T, Hojo S, Tsukimori K, Wake N, Kinukawa N, Taguchi T
  • 雑誌名: Pediatric surgery international 25(6) ページ: 487-492
• [雑誌論文] Three-dimensional power Doppler sonography in the diagnosis of a cystic sacrococcygeal teratoma mimicking a meningomyelocele : A case report (2009)
  • 著者名/発表者名: Sugitani M, Morokum S, Hidaka N, Kinoshita Y, Taguchi T, Tsukimori K, Wake N
  • 雑誌名: Journal of clinical ultrasound 37(7) ページ: 410
• [雑誌論文] Immunohistochemical characterization of mullerian mucinous borderline tumors : possible histogenetic link with serous borderline tumors and low-grade endometrioid tumors (2009)
  • 著者名/発表者名: Yasunaga M, Ohishi Y, Oda Y, Misumi M, Iwasa A, Kurihara S, Nishimura I, Okuma E, Kobayashi H, Wake N, Tsuneyoshi M
  • 雑誌名: Human Pathorogy 40(7) ページ: 965-974
• [雑誌論文] Homebox gene HOPX is epigenetically silenced in human uterine endometrial cancer cells by inhibiting serum response factor (2009)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi S, Asanoma K, Takao T, Kato K, Wake, N.
  • 雑誌名: International Journal of Cancer 124 ページ: 2257-2588
• [雑誌論文] The Level of RCAS1 Expression Is Inversely Correlated With the Number of Vitamin-Positive Stromal Cells in Epithelial Overian Cancer (2009)
  • 著者名/発表者名: Sonoda K, Miyamoto S, Kobayashi H, Ogawa S, Okugawa K, Taniguchi S, Wake N
  • 雑誌名: International Journal of Gynecologica Cancer 19(5) ページ: 838-843
• [雑誌論文] Preload index of the inferior vena cava as a possible predictive marker of hydropic changes in fetuses with Ebstein anomaly (2009)
  • 著者名/発表者名: Hidaka N, Sugitani M, Fujita Y, Fukushima K, Tsukimori K, Wake, N.
  • 雑誌名: J Ultrasound in Medicine 2009 28(10) ページ: 1369-1374
• [雑誌論文] Prenatal diagnosis of trisomy 16 mosaicism manifested as pulmonary artery stenosis (2009)
  • 著者名/発表者名: Hidaka N, Yamamoto N, Tsukimori K, Hojo S, Suzuki S, Wake N
  • 雑誌名: J Clin Ultrasound 37(2) ページ: 107-11
• [雑誌論文] Can we diagnose invasive cervical cancer during pregnancy as precise as in nonpregnant women? : maternal and perinatal outcome in pregnancies complicated with cervical cancers (2009)
  • 著者名/発表者名: Fukushima K, Ogawa S, Tsukimori K, Kobayashi H, Wake N
  • 雑誌名: Int J Gynecol Cancer 19(8) ページ: 1439-45
• [雑誌論文] Level of reactive oxygen species induced by p21Waf1/CIP1 is critical for the determination of cell fate (2009)
  • 著者名/発表者名: Inoue T, Kato K, Kato H, Asanoma K, Kuboyama A, Ueoka Y, Yamaguchi S, Ohgami T, Wake N
  • 雑誌名: Cancer Science 100(7) ページ: 1275-83