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2009 年度 実績報告書

機能性分子設計に基づく技術融合型分子イメージング法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 21685019
研究機関大阪大学

研究代表者

水上 進  大阪大学, 工学研究科, 准教授 (30420433)

キーワードタンパク質ラベル / β-ラクタマーゼ / 蛍光プローブ / 量子ドット
研究概要

細菌酵素β-ラクタマーゼの活性部位のアミノ酸に変異を導入することにより、ペニシリンあるいはセファロスポリンなどのβ-ラクタム誘導体は加水分解反応途中で反応が停止し、酵素-基質複合体が安定に形成される。この現象を応用し、β-ラクタマーゼの変異体をタンパク質タグとして利用することで、標的タンパク質に機能性分子を特異的に修飾する新規「タンパク質ラベル化システム」を開発した。ラベルする機能性分子としては、クマリン、フルオレセイン、ローダミンなどの蛍光色素、あるいはビオチンなどの機蛋白質と相互作用するものを選択した。これらのラベル化プローブを用いることで、細胞表面あるいは細胞内に発現させた蛋白質タグを選択的にラベル化することが可能であった。また、タンパク質にラベル化されると消光状態から蛍光状態に変化する「発蛍光型蛋白質ラベル化プローブ」の開発にも成功した。続いて、SNAP-tagなどの市販されているタンパク質ラベル化システムと同時に用いることができるかを検討した。遺伝子工学技術を用いて、二種類のタンパク質にそれぞれSNAP-tagおよび変異型β-ラクタマーゼを融合させ、培養細胞中で発現させた。ここに本研究で開発したラベル化プローブとSNAP-tagプローブを添加しラベル化を行なったところ、異なるタンパク質を異なる蛍光色素で同時にラベル化することに成功した。さらに、ビオチンラベル化プローブをアビジン修飾蛍光量子ドットと組み合わせることで、様々な蛍光波長の量子ドットのラベル化に成功した。

  • 研究成果

    (16件)

すべて 2010 2009 その他

すべて 雑誌論文 (8件) (うち査読あり 8件) 学会発表 (7件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Application of Stimuli-responsive Polymer for Development of Novel MRI Probes2010

    • 著者名/発表者名
      Satoshi Okada, Shin Mizukami, Kazuya Kikuchi
    • 雑誌名

      ChemBioChem (in press)

    • 査読あり
  • [雑誌論文] 化学プローブのデザイン・合成によるタンパク質機能の可視化ツール2010

    • 著者名/発表者名
      水上進・菊地和也
    • 雑誌名

      生化学 82

      ページ: 21-29

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Covalent Protein Labeling Based on Noncatalytic ss-Lactamase and a Designed FRET Substrate2009

    • 著者名/発表者名
      Shin Mizukami, Shuji Watanabe, Yuichiro Hori, Kazuya Kikuchi
    • 雑誌名

      J.Am.Chem.Soc. 131

      ページ: 5016-5017

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Development of Ratiometric Fluorescent Probes for Phosphatases Using pK_a Switching Mechanism2009

    • 著者名/発表者名
      Shin Mizukami, Shuji Watanabe, Kazuya Kikuchi
    • 雑誌名

      ChemBioChem 10

      ページ: 1465-1468

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Anion Sensor-Based Ratiometric Peptide Probe for Protein Kinase Activity2009

    • 著者名/発表者名
      Kazuya Kikuchi, Shigeki Hashimoto, Shin Mizukami, Tetsuo Nagano
    • 雑誌名

      Org.Lett. 11

      ページ: 2732-2735

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Design and Synthesis of Coumarin-based Zn^<2+> Probes for Ratiometric Fluorescence Imaging2009

    • 著者名/発表者名
      Shin Mizukami, Satoshi Okada, Satoshi Kimura, Kazuya Kikuchi
    • 雑誌名

      Inorg.Chem. 48

      ページ: 7630-7638

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Photoactive Yellow Protein-based Protein Labeling System with Turn-on Fluorescence Intensity2009

    • 著者名/発表者名
      Yuichiro Hori, Hideki Ueno, Shin Mizukami, Kazuya Kikuchi
    • 雑誌名

      J.Am.Chem.Soc. 131

      ページ: 16610-16611

    • 査読あり
  • [雑誌論文] in vivoイメージングを目指した可視化プローブ開発2009

    • 著者名/発表者名
      菊地和也・水上進
    • 雑誌名

      ぶんせき 4

      ページ: 200-202

    • 査読あり
  • [学会発表] 光感受性抗菌ペプチドを用いた薬物放出システムの開発2010

    • 著者名/発表者名
      水上進・細田真梨子・菊地和也
    • 学会等名
      日本薬学会第130年会
    • 発表場所
      岡山コンベンションセンター(岡山)
    • 年月日
      2010-03-28
  • [学会発表] 多機能性タンパク質ラベル化技術の開発とイメージングへの応用2010

    • 著者名/発表者名
      水上進・渡辺修司・山本拓・吉村彰真・菊地和也
    • 学会等名
      日本薬学会第130年会
    • 発表場所
      岡山コンベンションセンター(岡山)
    • 年月日
      2010-03-28
  • [学会発表] 希土類金属錯体を用いたin vivoイメージング用プローブの開発2009

    • 著者名/発表者名
      Shin Mizukami
    • 学会等名
      Gordon Research Conference - Bioorganic Chemistry
    • 発表場所
      Procter Academy, Andover, NH, USA
    • 年月日
      20090614-20090619
  • [学会発表] 光応答性薬物放出システムの開発2009

    • 著者名/発表者名
      水上進・佐竹孝文・菊地和也
    • 学会等名
      日本ケミカルバイオロジー学会第4回年会
    • 発表場所
      神戸市産業振興センター(神戸)
    • 年月日
      20090518-20090519
  • [学会発表] レポーター酵素活性を検出する^<19>F MRIプローブ2009

    • 著者名/発表者名
      水上進・松下尚嗣・滝川利佳・菊地和也
    • 学会等名
      日本分子イメージング学会第4回学会総会・学術集会
    • 発表場所
      学術総合センター(東京都千代田区)
    • 年月日
      20090514-20090515
  • [学会発表] 希土類金属錯体を用いたin vivoイメージング用プローブの開発2009

    • 著者名/発表者名
      水上進
    • 学会等名
      第47回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      アスティ徳島(徳島)
    • 年月日
      2009-10-30
  • [学会発表] 化学原理に基づくバイオイメージングツール開発2009

    • 著者名/発表者名
      水上進
    • 学会等名
      第2回稲盛フロンティア研究講演会
    • 発表場所
      九州大学伊都キャンパス(福岡)
    • 年月日
      2009-05-19
  • [備考]

    • URL

      http://www-molpro.mls.eng.oska-u.ac.jp/

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公開日: 2011-06-16   更新日: 2016-04-21  

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