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本研究は、分子から個体レベルまで総合的に内分泌攪乱物質を評価するシステムを開発することが目的である。アフリカツメガエルをモデルとし、本年度は以下の研究を行った。1) レポーターコンストラクトの作製。アフリカツメガエルのエストロジェン受容体(ER)、グルココルチコイド受容体(GR)、甲状腺ホルモン受容体(TR)及びアリルハイドロカーボン受容体(AHR)の標的遺伝子の転写調節領域をルシフェラーゼベクターに組込んだ、レポーターコンストラクトを作製した。一部は、in vitro及びin vivoで評価を行った。2) BiFC及びGFP融合核内受容体の発現コンストラクトの作製。受容体のリガンド依存的な核内移行を指標とした内分泌攪乱物質の評価を行うため、TRのBiFC/GFP融合ベクター及びAHRのGFP融合発現べクターを作製し、in vitroで評価を行った。3) トランスジェニックガエルの樹立。甲状腺ホルモンに応答する遺伝子の転写調節領域によりレポーター遺伝子を発現する数種類のトランスジェニックガエルを樹立した。これらのトランスジェニック個体を用いたビスフェノールAの評価が可能となった。
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