| 研究概要 |
【目的】相互作用蛋白質のゲノムスケール大規模解析(インタラクトーム解析)により蓄積した膨大な相互作用蛋白質の機能解析法、特に相互作用が担う生物学的機能の解析法を開発する。同時に、創薬の標的として有望な相互作用を標的とし、標的相互作用を競合阻害する(アンタゴニストとなりうる)、高結合型ペプチド断片を取得するためのスクリーニング法を開発する。これらにより、遺伝学における逆遺伝学に相当する「逆プロテオミクス」ともいうべき研究分野の開拓を志向する。
【達成状況】新規Y2Hレポーター遺伝子(糸状菌由来分泌型LacA)を用いた変異体ライブラリの定量的高速スクリーニング系を確立したことで、大規模変異体ライブラリー(10^6クローン)の高速定量的スクリーニングを実施できるようになった^1。ドメイン発現によりDam1複合体の機能を特異的に阻害することを実験的に証明した^2。同様の実験をオートファジー蛋白質に対して行い、ドメイン発現による相互作用阻害の様式や用量曲線などに関する知見を得た(論文投稿中)。ヒトMad2蛋白質に強固に結合する16アミノ酸残基からなるペプチド断片を加算的なスキャニング変異導入と高速スクリーニングにより作出し、in vitroの系で動力学的解析を試みた(論文投稿準備中)。代謝調節蛋白質に結合する人工的なペプチド断片の作出を試み、ランダムペプチドライブラリーのスクリーニングを前年度に引き続き実施中である。さらに平成23年度は、得られた蛋白質断片の効率的生産系の開発を試み、難生産性蛋白質を効率的に菌体外発現できる組換え酵母発現誘導法を確立し、報告した^3。
^1 Kamiya et al.,J. Biotechnol. 2010 ;^2 Ikeuchi et al.Biotech. Progr. 2010 ; ^3 Kimata et al.,J. Bioschi. Bioeng. 2012
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