| 研究概要 |
単細胞性の緑藻であるクラミドモナスは真核細胞の生物時計モデル系として大きな可能性を秘めた生物である。しかし、これまでにクラミドモナスの時計遺伝子は同定されておらず、生物時計の分子レベルでの研究はほとんど進んでいなかった。我々は極めて効率的な順遺伝学的遺伝子同定法を開発し、概日リズム変異体の分離と時計遺伝子の網羅的な同定に成功した(Matsuo et al., Genes Dev, 2008)。本研究課題ではこれまでの研究を発展させ、緑藻の生物時計の分子機構1の解明を目指す。具体的には、1)時計遺伝子の過剰発現および発現抑制による時計遺伝子間の発現制御の解析、2)TAPタグを使った時計タンパク質複合体の精製とその複合体の解析、3)YFPタグを使った時計タンパク質の細胞内での空間的挙動の解析である。転写因子に関しては、4)クロマチン免疫沈降法でその因子が結合するプロモーターを同定する。これらの実験により、時計遺伝子が発現した後、時計タンパク質は何と複合体を形成し、細胞内の何処へ動くのか、転写因子はどの遺伝子のプロモーターに結合して制御するのか、また、各時計遺伝子間の遺伝学的な相互関係はどうか(活性化か抑制か)を明らかにする。本年度はYFPタグ、LUCIFERASEタグおよびHAタグを融合した時計タンパク質をクラミドモナスに発現させ、時計タンパク質の時空間的挙動を明らかにした。また、クロマチン免疫沈降法により、時計タンパク質ROC75は時計遺伝子ROC46のプロモーター領域に結合することを明らかにした。
|
