| 研究概要 |
生物は体内に概日時計を持っており、多くの生理現象は概日時計によって調節されることが知られている。概日時計を持つ最も単純な生物であるシアノバクテリアの概日時計システムは協同して働く二重の振動発振経路をもっている。本研究課題はKaicリン酸化サイクルに依存せず機能する振動発振経路の実体を解明すること、および二つの経路がどのように相互作用しているか、機能的な分業が行われているのかを調べることを目的として研究を行った。
[1] KaiCリン酸化サイクルに依存せず機能する振動発振経路の解明
・ リン酸化の変動を伴わずにATPase活性が変動し、それが構造変化を起こすことによって遺伝子発現を概日制御し、細胞に概日リズムが形成されるのでないかと考え、リン酸化のおこらないKaicを精製しATPase活性の測定を行った。現在のところ、活性に振動は観察されていない。また、ゲルろ過クロマトグラフィーを用いてKaiA, KaiB, KaiCと遺伝子発現への出力を担う因子との複合体のストイキオメトリ計測実験を行っている。
・ KaiA, KaiB, KaiCからの情報を受け取る因子の探索を行うため、リン酸化部位変異株をバックグラウンドに用いてサプレッサースクリーニングを行うためにライブラリーを作製し,スクリーニングを行った。
[2] 二重の振動発振経路の相互作用機構の解析
・ 1つの振動発生経路しか持たないシステムに変化を与えその応答を観察・比較し、カップリングや分業の形式の推測を行い相互作用機構の解析を行うため、測定方法の検討を行った。
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