| 研究概要 |
単細胞生物においても多細胞生物においても,細胞が正常に機能し調節されるためには,細胞の極性が適切に形成される必要がある.細胞の極性が形成されるときには,細胞極性に関連する一連のタンパク質が細胞膜の特定の場所に適切な複合体を形成し配置される.本研究課題では,細胞の極性形成に関連するLGNとそのパートナー分子複合体における相互作用およびLGNの制御機構について構造生物学的解析を進めることで分子メカニズムを明らかにすることを目的としている.LGNのパートナータンパク質にInsc(Inscuteable)があり,「LGN-Insc複合体」はほ乳動物から線虫まで進化的にも保存されているタンパク質複合体である、ショウジョウバエではこの複合体が、神経幹細胞の非対称分裂の制御に関与していることが示されている.当該年度は,LGNとInscとの複合体について構造基盤を明らかにするためX線結晶構造解析を進めた.前年度に同定したLGNのInsc結合領域を含む領域とInscのLGN結合領域を含む領域について,大腸菌を用いた大量発現・精製系を確立し結晶化に着手した.結合領域をさらに削り込むことで、良好なLGN-Insc複合体の結晶を得ることができた.この結晶を用いてX線回折実験を行い,2.8オングストローム分解能のデータセットを収集に成功した.また,LGNのパラログであるAGS3についてもInscとの共結晶化を試み,AGS3-Insc複合体の結晶を得た.LGN-Insc複合体について構造解析を進め,さらに分解能向上を目指して結晶化条件の最適化を行っている.
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