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本研究では、細胞間接着の裏打ちアクチンの形成機構を調べることにより細胞間接着機構とアクチン細胞骨格の相互作用を解明することを目的としている。そのために、上皮細胞のアクチン形成を制御する因子を単離するために形質膜透過型細胞を作製した。さらに、形質膜透過型細胞の裏打ちアクチンを自由に操作することを試みたが、安定した系を構築するにはいたらなかった。そこで、本来の目的を達成するため、局在に着目した発現クローニング法を用いて細胞間接着部位に局在するアクチン制御因子を単離するアプローチを取った。その結果、低分子量Gタンパク質RhoAのヌクレオチド交換因子(GEF)の一種が細胞間接着部位に局在することを見出した。そとで、このRhoGEFに対する抗体を作製し、マウスの組織や培養細胞を用いた免疫染色法によって細胞間接着部位に局在することを確認した。また、RhoAはアクチン細胞骨格の再構成を司ることが知られているため、RhoAの活性化因子であるRhoGEFが細胞間接着の裏打ち領域においてアクチンの再構成を制御していることか想定される。実際に、ノックダウンによってこのRhoGEFの発現を抑制すると、細胞間接着形成時の細胞骨格再構成に変化が見られた。また、RhoGEF強制発現細胞では、細胞間にはたらく張力が増加しているような表現系が観察された。これらのことより、今回単離されたRhoGEFは、RhoAの活性化を介して細胞間接着部位のアクテン動態を制御している可能性が示唆された。
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