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2010 年度 実績報告書

ポリリン酸による代謝経路の調節機構解明と発酵プロセス制御への応用

研究課題

研究課題/領域番号 21780075
研究機関広島大学

研究代表者

廣田 隆一  広島大学, 大学院・先端物質科学研究科, 助教 (90452614)

キーワードポリリン酸 / ポリリン酸キナーゼ / アミノ酸飢餓 / 代謝 / PhoU
研究概要

大腸菌におけるポリリン酸蓄積と代謝活性変化の関係を調べるため、大腸菌PPK複合体の解析を行った。栄養十分条件とアミノ酸飢餓条件におけるPPK複合体をPull-down解析で調べた結果、アミノ酸飢餓時にグルタミン酸シンターゼ、NADHデヒドロゲナーゼ、リボフラビン合成酵素などのタンパク質のPPKに対する結合量が増加していることが明らかとなった。これらの破壊株におけるポリリン酸合成能には大きな差は見られなかったが、アミノ酸飢餓時複合体のポリリン酸合成活性は栄養十分条件複合体の2倍以上の活性を示すことが分かった。このことから、栄養条件によってPPKの結合因子が変化し、それによってポリリン酸合成活性が大きく変化する事が明らかとなった。次に、PPK-GFP融合タンパク質を発現させた大腸菌を用いて、栄養条件によってPPKの細胞内局在がどのように変化するかを調べた。PPKは栄養十分条件で増殖する期間は細胞内に散在していたが、アミノ酸飢餓時には数カ所に凝集することが明らかとなった。このことから、栄養条件によってPPK結合因子の変化とPPK局在、そしてポリリン酸合成活性の変化が連動して起こることが示唆された。栄養十分条件においてポリリン酸合成が亢進しない理由を明らかにするため、PPKに結合する因子のひとつとして同定されたリン酸レギュロンの制御因子PhoUのポリリン酸合成活性に及ぼす影響をin vitroで解析した。その結果、PhoU存在条件下では非存在下に比べてPPK活性が低下することが明らかになった。このことから、栄養十分条件におけるポリリン酸合成の抑制にPhoUが関与している可能性が示唆された。

  • 研究成果

    (8件)

すべて 2011 2010 その他

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (4件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Overproduction of YjbB reduces the level of polyphosphate in Escherichia coli : a hypothetical role of YjbB in phosphate export and polyphosphate accumulation2011

    • 著者名/発表者名
      K.Motomura, R.Hirota, N.Ohnaka, M.Okada, T.Ikeda, T.Morohoshi, H.Ohtake, A.Kuroda.
    • 雑誌名

      FEMS Microbiology Letters

      巻: (in press)

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Bacterial phosphate metabolism and its application to phosphorus recovery and industrial bioprocesses2010

    • 著者名/発表者名
      R.Hirota, A.Kuroda, J.Kato, H.Ohtake
    • 雑誌名

      Journal of Bioscience and Bioengineering

      巻: 109 ページ: 423-432

    • 査読あり
  • [雑誌論文] 微生物のポリリン酸蓄積機構解明と利用2010

    • 著者名/発表者名
      黒田章夫、廣田隆一、本村圭
    • 雑誌名

      Phosphorous Letter

      巻: 68 ページ: 7-18

  • [学会発表] 大腸菌のPhoU変異によるポリリン酸蓄積とゲノム不安定化機構の解析2010

    • 著者名/発表者名
      廣田隆一
    • 学会等名
      日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸ポートアイランド
    • 年月日
      2010-12-07
  • [学会発表] 大腸菌ポリリン酸高蓄積phoU変異株の不安定化機構の解明2010

    • 著者名/発表者名
      中井茂人、半田智大、本村圭、廣田隆一、黒田章夫
    • 学会等名
      日本生物工学会
    • 発表場所
      宮崎シーガイア
    • 年月日
      2010-10-28
  • [学会発表] 大腸菌YjbBはリン酸排出促進によりポリリン酸蓄積を抑制する2010

    • 著者名/発表者名
      本村圭、廣田隆一、大中信輝、岡田真以、黒田章夫
    • 学会等名
      日本生物工学会
    • 発表場所
      宮崎シーガイア
    • 年月日
      2010-10-28
  • [学会発表] Inorganic polyphosphate is involved in the genetic instability of the pho U mutant in Escherichia coli2010

    • 著者名/発表者名
      R.Hirota, K.Motomura, A.Kuroda
    • 学会等名
      American Society for Microbiology
    • 発表場所
      San Diego Convention Center,サンディエゴ、米国
    • 年月日
      2010-05-24
  • [備考]

    • URL

      http://home.hiroshima-u.ac.jp/akbio/

URL: 

公開日: 2012-07-19  

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