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がん細胞特異的(未分化細胞特異的)発現ベクターの構築
がん細胞特異的発現制御を行えるベクター構築のために、目的遺伝子(Oct3/4およびc-Myc)のプロモーター領域のクローニングを行った。すなわち、マウスES細胞EB5からゲノムDNAを抽出し、それぞれのプロモーター領域特異的配列を有した数種のプライマーペアを用いてPCRにて増幅を試みた。両プロモーターにおいて、それぞれ一つのプライマーペアで目的サイズのPCR産物が得られたので、目的の配列でことを確かめるために、シークエンサーを用いて確認を行い、マウスOct3/4およびc-Myc遺伝子プロモーターをクローニングすることに成功した。次にこれらプロモーター領域が、がん(未分化)細胞において特異的に機能することを確かめるために、ルシフェラーゼアッセイ用ベクターにサブクローニングを行い、構築することができた。2つのルシフェラーゼ用ベクターのうち、Oct3/4ルシフェラーゼベクターを、Oct3/4タンパク質が発現していることが知られているEB5細胞に導入し24時間後にルシフェラーゼ活性を測定したところ、高い活性を示した。すなわち、このOct3/4プロモーター領域は、未分化細胞において機能することが示された。しかしながら、マウス繊維芽細胞を用いて同様の実験を行ったところ、EB5に比べ低い数値ではあったが活性があったので、未分化細胞特異的な領域を特定する必要がある。一方、c-Mycルシフェラーゼベクターに関しては、現在検討中である。
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