| 研究概要 |
DGKζによるGPCR agonistによるAP-1活性抑制効果が、ROS刺激により減弱することを確認していた。Cos7 cellを過酸化水素にて刺激を行い、ERK1/2が活性化されることを確認した。また、DGKζのトランスフェクションにより、この活性化が、抑制されることを確認した。すなわち、Cell lineにおいても、酸化ストレスによりPKCを活性化を介してERK1/2 AP-1が活性化し、DGKzによってそれらが抑制されることを示唆した。引き続いて、DGKzのSUMO修飾に関して検討を行った。HA-tagged SUMO1, HA-tagged SUMO3, PIAS1, dominant negative PIAS-1,flag tagged-DGKzをCHO cellにトランスフェクションし、DGKzのSUMO修飾を検討した。DGKz,HA-SUMO3のみでは、DGKz-SUMOylationを確認できなかったが、PIAS-1のco-transfectionによりDGKz SUMO修飾が有意に亢進した。SUMO修飾の確認は、IP anti-flag antibody, IB anti-HA antibodyおよび、IP anti-DGKz antibody IB anti-SUMO antibodyで確認した。DGKzのSUMO修飾はSUMO1によるものよりSUMO3によるもののほうが強い傾向があった。さらに、dominant negative PIAS-1によりDGKzのSUMO修飾は有意に抑制され、PIAS-1を介してDGKzのSUMO修飾が生じていることが示唆された。現在、肥大心、加齢心、糖尿病心臓において、DGKz SUMO修飾が生じているかの検討をvivoで行い、DGKz SUMOによるPKCを細胞内シグナル伝達経路への関与を検討している。
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