| 研究概要 |
急性骨髄性白血病を含む多くのガンで特異的に発現するとされているFolate Receptor β(FR-β)をターゲットに、si-RNAなどを腫瘍細胞特異的にデリバリーするシステムの構築を目指し、FR-βに対するアプタマーの開発を開始した。FR-β、Flag-tagged FR-βをコードするベクターをChinese Hamster Ovarian (CHO) cellに導入し作成したFR-β発現細胞を用いて、今年度はまずmRNA levelでの発現を確認した。これらの細胞とその親細胞を交互に用いてcell SELEXを6サイクル行ったが、アプタマーの有意な濃縮は認められなかった。そこで、これらFR-β導入細胞における蛋白レベルでのFR-βの発現を、FR-βに対するポリクローナル抗体(市販品)を用いてウェスタンブロットにて試みたが確認できなかった。この抗体の品質を検証するために、FLAG-tagged FR-βを導入したCHO cellにおける、FLAG-tagged FR-βの細胞表面への発現を抗FLAG抗体を用いてFACSで確認した。同じ細胞において抗FR-β抗体での検出が出来なかったことから、最終的にこのポリクローナル抗体の検出感度に問題があると判断した。今後FR-βを導入した他の細胞(KG-1, K562)を用いてcell SELEX法を進める一方、Flag-tagged FR-β、GFP-tagged FR-βを導入した細胞よりFlag-tagged FR-β、GFP-tagged FR-βを精製し、通常のSELEX法にてもアプタマーの濃縮を試みる予定である。また引き続きFR-βに対する適切な抗体を検索し、白血病細胞におけるFR-βの発現も確認する予定である。
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