| 研究概要 |
我々はレンチウイルスベクターを用いてshRNAを造血幹細胞に導入すると無核の血小板でも目的蛋白の抑制が認められることを報告した.Vinculinを同様の手法で抑制するとshRNAを発現する造血幹細胞由来の血小板産生が減少する結果に着目し,Vinculinが造血幹細胞の生着・維持に関与するか否かの検討を行った.U6プロモーターの下流にマウスVinculinに対するshRNA配列を発現し,かつCMVプロモーターでEGFPを発現するレンチウイルスベクターを作製した.マウスc-kit+Scal+Lin-(KSL)細胞にこのレンチウイルスベクターを感染させ造血幹細胞移植を行うとVinculinへのshRNA配列を発現する幹細胞由来の造血が認められなかった.一方,インテグリン活性化の最終段階に必要であるTalin-1の抑制では造血幹細胞の生着への影響は軽微であった.Vinculinの抑制はKSL細胞のSDF-1に対する遊走能や移植後の骨髄・脾臓へのホーミング,またCFU-G,CFU-GMへの分化を抑制しなかったが,LTC-ICやCobblestone-like areaの頻度は有意に抑制した.サイトカイン存在下でのin vitroでの細胞周期はVinculinの抑制によりS期の減少とApotosisの増加を認めた.フィブロネクチンへの接着反応はTalin-1の抑制により減じたが,Vincluinの抑制では影響を受けなかった.Vinculinは細胞周期を調節することでインテグリンの機能制御とは関係なく細胞周期の調節を介して造血幹細胞の維持に関与することが示唆された.
|
