造血幹細胞(HSCs)しての性質(自己複製能と多分化能)の維持には造血支持細胞が深く関与しており、骨髄内にそれらの細胞で構成される造血幹細胞ニッチェが存在することが知られている。以前我々は、HSCsと血管・血液共通前駆細胞(Hemangioblast)とのサブトラクション法により骨髄再構築能の有無に関与する遺伝子のスクリーニングを行った。このスクリーニングにより膜蛋白質をコードする新規遺伝子、S76遺伝子を同定した。本研究では、造血幹細胞と造血幹細胞ニッチェに重要な役割を持つ可能性があるS76遺伝子の解析を通して、これらの二つの細胞の相互作用を明らかとしていくことを目的としている。 申請者はS76タンパク質のin vivoにおける機能を解析するために、S76コンディショナルノックアウトマウスの作成を行った。S76遺伝子のゲノムは2つのエクソンから構成されている。申請者は、第一エクソンにある開始コドンを欠損させたベクターと、第二エクソン全体を欠損させたベクターを作製した。開始コドンを欠損させるためのベクターについては、ES細胞での組み換えと、キメラマウスの作成を行い、Germ line transmissionに成功した。次に、Flpトランスジェニックマウスとの掛け合わせにより、薬剤耐性遺伝子を抜いたマウスを得ることができた。現在は、Tie2-Creトランスジェニックマウスとの掛け合わせを行い、S76(fl/+)Tie2Cre+の♂マウスを作製することに成功し、S76(fl/fl)♀マウスとの掛け合わせをして、S76(fl/fl)Tie2Cre+のマウスが生まれてくるかどうかの検討を行っているところである。今後の予定では、現在作製できたマウスの解析とともに、Mx1-Creトランスジェニックマウスと掛け合わせすることで、成体での血液細胞でS76遺伝子を欠損させ、その表現系を解析する予定である。
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