表皮のバリアに重要な角層細胞間脂質を輸送する蛋白質であるABCA12の機能欠損が最重症の遺伝性皮膚疾患・道化師様魚鱗癬の病因であることが近年、解明された。これまでに魚鱗癬をはじめとする遺伝性角化症の治療は、保湿剤の外用、角化症治療薬としてのレチノイドの内服、炎症を伴った場合はステロイドの外用、内服といった対症治療が中心であった。ABCA12の機能をさらに詳しく解析することにより、病態の本質に沿った治療法の開発が望まれている。本研究では、細胞へのABCA12の補充を試み、脂質輸送が改善するか検討するため、次の実験を行っている。ABCA12リコンビナント蛋白質を調製するために、ヒトABCA12のコンストラクトを哺乳類細胞(293細胞)ヘカチオニックリポソームを用いてトランスフェクションし、発現の誘導を試みた。ABCA12の強制発現について、抗ABCA12抗体を用いたウエスタンブロッティング法により解析を行うことで、ABCA12の強制発現を確認した。現在、ABCA12の安定発現株の樹立を目指して、より効率よく発現する条件を検討しているが、良いクローンは今のところ得られておらず、さらなる検討を試みている。また、ABCA12に対するsiRNAを用いてABCA12が安定的に発現抑制されている細胞株の樹立についても検討を行っているところであるが、現在のところ安定的に発現抑制されている株は得られておらず、さらなる検討を行っている。今後、ABCA12が高発現している安定発現株を得ることによって、ABCA12をタンパク質として調製するための原料を得ることができ、また、ABCA12が安定的に発現抑制されている細胞株の樹立によって、ABCA12の補充による脂質輸送の改善についての検討を行うことが出来ると考えられる。以上の実験結果を踏まえて、今後、ABCA12含有リポソームの調製と効果の検証を行う系を構築することは極めて重要であり、病態の本質に沿った治療法の開発のために必要である。
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