| 研究概要 |
われわれはArray-based comparative genomic hybridization(A-CGH)法を用いて,口腔扁平上皮癌に生じるDNAコピー数異常のスクリーニングを行い,染色体領域8q24.2および3p26.3におけるコピー数異常を口腔扁平上皮癌における新規予後マーカー候補として検出しました.
本研究では口腔扁平上皮癌の新規予後マーカーとなる,ゲノム異常や遺伝子発現の異常を明らかにすることを目的としています.8q24.2および3p26.3領域のFISH法によるコピー数異常の検討を行いました.
われわれが既に凍結保存している,口腔扁平上皮癌手術施行症例の凍結標本をスライドガラス上に展開し実験に供しました.A-CGHの結果を基に8q24.2領域および3p26.3領域のFISHプローブを作成し,検討を行いました.8q24.2領域および3p26.3領域ともにArray-CGH法によるスクリーニングの結果と一致した結果が得られました.Real time PCR法を用いてWISP1遺伝子およびCHL1遺伝子のコピー数異常の検討を行いました.A-CGHを行った際に,口腔扁平上皮癌組織からマイクロダイゼクション法により腫瘍細胞を選択的に回収し,抽出したDNAをPCR法のテンプレートとして検討に用いました.Applied Biosystems社より販売されているCopy number variation検討用gWISP1遺伝子およびCHL1遺伝子に対するプライマー・プローブのセットを購入して,Taq-Man PCR法にて検討を行いました.容易にPCR産物の良好な増殖曲線がえられ,3p26.3に関しては予後との相関が見られました.8q24.2に関しては,Array-CGH法の解析結果と一致しなかったため,再検討を行いました.しかしながら,8q24.2に関しては予後との相関はありませんでした.
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