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本研究では小胞体とゴルジ体を経由した分泌小胞輸送過程におけるRab GTPaseの活性変化を可視化するために、Ypt1p、Ypt31/32p、Sec4pの1分子型FRETプローブの作製を試みている。まずYpt1pのエフェクターであるUso1pのGTP結合型Ypt1pへの結合領域を特定してYpt1pのFRETプローブの作製を試みたが、Ypt1pの活性変化を反映したプローブを得ることができなかった。しかし、Ypt1pのGAPであるGyp1pのGAP活性を欠失した変異タンパク質を基にしたプローブで、Ypt1pの活性変化を反映したプローブを得ることができた。Ypt1pプローブは点状の細胞質性の分布を示すが、そのFRET効率はスポット間で異なることがわかった。Ypt31/32pについてはGyp1pのN末領域、Rcy1pのC末領域を基にしたFRETプローブの作製を試みているが現在のところ良好なプローブを得ることができていない。一方でSec4pについては、エフェクターであるSro7pのC末領域を基に作製したFRETプローブで良好な結果を得ることができた。プローブ内のSec4pを野生型からGTP結合型やGDP結合型に変えたプローブ間でのFRET効率の比較から、このプローブがSec4pの構造変化を確かに認識することを示した。さらにYFPの光退色によりCFPの蛍光強度が上昇したことから、このプローブにおいてFRETが起こっていることを確認した。このSec4pプローブを用いた詳細な解析により、芽の先端や分裂隔壁におけるSec4pの活性は不均一であることを明らかにした。Ypt1pとSec4pのプローブを利用した解析によりこれらのRabの局在する場所と活性の高い場所が必ずしも一致しないことを始めて明らかにすることができた。
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