研究課題
若手研究(スタートアップ)
ミトコンドリアNADH-ユビキノン酸化還元酵素(複合体-I)は、細胞のエネルギー代謝に置いて重要な役割を担う呼吸鎖酵素である。本研究は酵母複合体-Iにおけるキナゾリン型阻害剤/ユビキノン結合部位の同定と相互作用の解析を行うことを研究の目標とした。好気性酵母(Y. lipolitica)ミトコンドリアより単離された複合体-Iを用いて、光親和性キナゾリン型プローブ([125I]AzQ)による光親和性標識実験を行った。[125I]AzQの酵母複合体-Iに対するIC50はおよそ20nMであり、本プローブはリン脂質存在で下49kDaサブユニットを特異的に標識した。22年度は(1)49kDaにおける[125I]AzQ結合部位の解析(2)酸化還元状態の変化とプローブラベル率との関係についての考察を進める予定である。一方、複合体-Iにおけるユビキノン結合部位を明らかにする目的で、ビオチン化光反応性ユビキノンプローブの合成を行った。本年度は、同じ出芽酵母(S. cerevisiae)由来の酸化還元酵素であるNdil(ロテノン非感受性NADH-キノン酸化還元酵素)におけるキノン反応部位の解析を行った。ウエスタンブロットなどの生化学解析、エドマン分解や質量分析等の機器分析を駆使した結果、シングルアミノ酸での結合部位の同定には至らなかったものの、補酵素であるFADイソアロキサジン環近傍のG374-E399の領域(26アミノ酸)にキノン反応部位が存在することを明らかにした。(Murai et al. (2010) Biochemistry 49, 2973-2980)今後、複合体-Iに対しても同様の標識実験を行う予定である。
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Biochemistry 49
ページ: 2973-2980
Biochim.Biophys.Acta 1787
ページ: 1106-1111
