研究概要 |
Rag2欠損マウスにOvalubumin (OVA)に特異的なT細胞受容体のtransgenicマウス(DO11.10)を交配したRag2^<-/->DO11.10マウスでは、T細胞は全てOVA特異的であり、胸腺で自然に分化するnaturally occurring regulatory T cell (nTreg)を欠損しているが、inducible regutatory T cell (iTreg)は保たれている。一方Rag2<-/->^DO11.10 Scurfy (sf)マウスでは、nTreg、iTregともに存在しない。また、全身の核内にOVAを発現するLd-nOVAマウスをRag2^<-/->DO11.10マウスと交配すると(Rag2^<-/->DO11.10x Ld-nOVA:以下RagDBLと呼ぶ)、T細胞の多くはCD4^+CD25^+Foxp3^+のnTregに分化している。本申請研究では、Rag2^<-/->DO11.10,Rag2^<-/->DO11.10sf,及びRagDBL由来のT細胞を、T細胞欠損マウスに移入後にOVA/alumを腹腔内投与後、OVA点鼻を繰り返してアレルギー性気道炎症を作成し解析を行った。肺と縦隔リンパ節については単離細胞液を作成し、FACSにて主にCD4^+T細胞の表面マーカー、Foxp3発現、細胞内サイトカインを解析した。また気管支肺胞洗浄液(BALF)中の細胞数、細胞分画、サイトカイン(IL-9,IL-13など)測定を行った。Thy1.1で標識して移入したRag2^<-/->DO11.10由来の丁細胞がFoxp3を発現し、確かに生体内でiTregが誘導されることを確認した。一方、Rag2^<-/->DO11.10由来T細胞の移入群と、Rag2^<-/->DO11.10sf由来T細胞の移入群では、気道炎症(BALF中の好酸球数、肺組織、細胞内サイトカインなど)の程度に明らかな差を認めなかった。移入先を野生型マウスに変えた実験も施行したが、同様の結果だった。またRag2^<-/->DO11.10由来T細胞,及びRag2^<-/->DO11.10sf由来T細胞を、それぞれin vitroでTh2誘導条件下にて培養したが、IL-4産生T細胞の比率には、明らかな差を認めなかった。また、この実験過程で、移入先に用いたT細胞欠損マウス(Rag2^<-/->マウス及びTCRα^<-/->マウス)では、加齢に伴い好中球性の気道炎症に引き続き肺の線維化が自然に生じることが判明した。この背景肺に生じる炎症・線維性変化により、iTregによるアレルギー性気道炎症に対する影響が不明瞭になったと考えられた。また移入先を野生型マウスにした実験では、移入したT細胞が相対的に少なく気道炎症に対する効果が不十分だった可能性がある。nTregについては現在検討中である。今後、引き続き実験系を工夫して解析を続けたい。
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