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本研究は象牙質形成において必須の役割を担うDSPP(Dentin Sialophosphoprotein)タンパクの開裂のメカニズムと意義の解明を目的とし以下の通り実施した。
1. マウスラインの選択。Normal及びmutated DSPPタンパクコード遺伝子をIRES-GFPに繋げたcDNAをそれぞれ象牙質特異的に強発現させたトランスジェニックマウス(以下Tgと表記)の作製を試みた。まず、normal DSPP Tgにおいては歯牙特異的にGFPを強または低発現するマウスラインを樹立できた。現在、これらマウスからタンパクサンプル及び組織切片を作製し、DSPPの発現量を検討中である。Mutated DSPP Tgにおいては、founderからGFP陽性のマウスを得ることができなかったため、アメリカ合衆国国立衛生研究所のDr. Ashok Kulkarniに依頼し、コンストラクトを再injectionし、最終的に一つのGFP陽性マウスラインのfounderを得ることに成功した。2.Mutated DSPPのInvivoにおける動態解析。及び3.表現型の解析。得られたGFP陽性マウスラインは現在コロニーを増やし、DSPPの発現量を定量している状態であり、未だ表現型の解析に至っていない。次年度行う予定である。4.象牙芽細胞培養について.上記と同様の理由により、現在マウスから細胞を得ることは不可能なため、間葉系幹細胞にレトロウイルスを用いてnormal及びmutated DSPPのcDNAを遺伝子導入し、ln vjtroでのこれらDSPPの動態を解析するための実験系を樹立中である。
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