| 研究概要 |
Glyceraldehyde-3-phosphate-dehydrogenase (GAPDH)の酵素活性と酸化還元状態との関連についての解析
GAPDHがnitric oxide (NO)によるS-nitrosylationによって核移行しアポトーシスを起こすことが知られている。我々はラット心筋芽細胞H9c2コントロール細胞(H9c2-control)とH9c2のglutaredoxin (GRX)過剰発現細胞(H9c2-GRX)をNO-donorであるS-nitroso-N-acetyl-DL-penicilamine (SNAP)で刺激後にMTT assay等で細胞の生存率を比較し、GRX過剰発現がNOによる細胞死からH9c2細胞を保護していること、また、GRXの過剰発現がNO-donorの刺激によるGAPDHの核移行を抑制することで、アポトーシスの抑制に影響を与えている可能性を示唆するデータを得ている。
(1)GRX過剰発現細胞におけるGAPDHのS-nitrosylationの抑制
H9c2-controlとHgc2-GRXをそれぞれSNAPで刺激後、ウエスタンブロット法で比較し、E9c2-GRXではNOストレス下でのGAPDHのS-nitrosylationが抑制されていることが認められた。また、刺激したそれぞれの細胞を、フリーのSH基に結合する薬剤である4-acetamide-4'-maleimidelstilbene-2,2'-disulfide acid (AMS)で処理後、ウエスタンブロット法で比較した。NOストレス下でのGAPDHのSH基は、H9c2-GRXではほぼ還元型であった。
以上より、GRXがNOストレスによるGAPDHの酸化修飾とS-nitrosylationを抑制することにより、細胞をアポトーシスから保護していることが示唆された。
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