| 研究概要 |
今回のわれわれの研究目的は、オートファジーを調節する働きを有する新規のp53標的遺伝子をマイクロアレイで網羅的に同定することである。まず、レトロウイルスを用いてヒト肝細胞癌細胞株HepG2細胞及びヒト線維芽細胞株HFF2細胞についてp53 knock-down細胞を構築した。p53 wild type 細胞とp53 knockdown細胞を同時にアミノ酸飢餓状態とし,何れの細胞でもオートファジーが誘導されることを、抗LC3抗体および抗p62抗体を用いたwestern blotting法にて確認した。また、これらの細胞をアミノ酸飢餓後、継時的にp53蛋白の発現量が増加することを確認した。p53 knock-down細胞を及びp53 wild type細胞と同時にアミノ酸飢餓状態とし,オートファジーが誘導された状態でDNAマイクロアレイ解析用にそれぞれの細胞のmRNAを抽出し精製した。mRNAからcDNAを精製し,そのクオリティを確認後、Filgen社が提供するcDNAマイクロアレイを行った。現在p53の有無によるオートファジー誘導時の遺伝子発現の違いを評価中である。これにより、癌細胞におけるp53に依存したオートファジー関連遺伝子の同定が可能となると思われる。評価が終わり次第、論文執筆予定である。
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