| 今後の研究の推進方策 |
精密な細胞内光化学的RNA編集に向け、引き続きカルバゾール含有グアノシン(GK)誘導体を合成する。グアノシンを原料とし、塩基部分のBz保護、5'位のDMTr保護の後、リンカーを介し、カルバゾールを糖の3'位に導入する。その後、アミダイト化をおこない、DNA合成機によりGK含有オリゴDNAを得る。カルバゾール導入時のリンカーとなるメチレン鎖長を変数とし、シトシンに対して最も光架橋する素子を選別する。光反応部位にカルバゾールではなく、ピラノカルバゾールを導入したGK誘導体の合成もおこなう。GK誘導体含有オリゴDNAとその相補鎖RNAを混合し光照射した後、HPLC解析により光架橋・開裂反応評価をおこなう。また、光架橋したDNAを酵素分解し、シトシンとの光架橋ダイマーを取り出したのち、1H-NMR, 13C-NMR, HSQC, HMQCによる構造決定をおこなう。さらに、オフターゲット効果克服に向けて、対合塩基認識能の評価をおこなう。シアノビニルカルバゾールは対合塩基認識能を持たないため、対合塩基がA, T, G, Cいずれの塩基であってもTm値に変化はない。一方、今回合成するGK誘導体は塩基部分に天然塩基を保持しているため、相補的な塩基のみ高いTm値を示すと考えられる。各種熱力学的パラメータ(ΔG, ΔH, ΔS)を評価し、糖2'位の炭素でDNAバックボーンと繋がった歪んだ構造に起因する負の効果とスタッキングによる正の効果が、どのように熱的安定性に寄与して天然DNA-RNA2重鎖の熱的挙動に相似させているのか明らかにする。
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