| 研究課題/領域番号 |
21H02925
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
伊藤 功朗 京都大学, 医学研究科, 准教授 (40447975)
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| 研究分担者 |
オケヨ ケネディオモンディ 京都大学, ウイルス・再生医科学研究所, 講師 (10634652)
今井 晶 (松島晶) 京都大学, 医学研究科, 特定助教 (40828943)
今井 誠一郎 京都大学, 医学研究科, 特定助教 (90572610)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 肺上皮細胞 / マイクロメッシュ |
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| 研究実績の概要 |
京都大学医学部附属病院呼吸器外科において施行された肺摘出組織から肺初代上皮細胞の単離と培養を行った。フィーダー細胞との共培養下に上皮細胞コロニーの良好な発育を確認し、週1回の継代による長期培養実験において、3か月を経過後も良好な増殖効率が保たれること、また任意の時点で凍結保存が可能であることも確認した。
上記により、各患者由来のヒト肺初代上皮細胞の再現性の高い安定的な供給が可能となったため、これを用いた感染実験モデルを作成に着手した。第一に、マイクロメッシュに細胞外マトリクスの薄膜を張った培養基材について、強度と細胞接着性の最適化を行った。薄膜をPFA固定したものを低濃度の細胞外マトリクスでコートすることで良好な接着が得られ、、播種後2週間にわたり上皮シートを維持することに成功した。第二にこの上皮シートの特性を評価するため、固定標本の免疫蛍光染色により構造と分子マーカーの発現確認を行った。これにより、上皮型カドヘリンおよびオクルディンを発現する単層の上皮シートであることが確認できた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
京都大学医学部附属病院におけるCOVID-19対策として研究活動が制限され、ヒト初代細胞の培養が開始できたのは2021年11月であった。現在も制限のため共焦点顕微鏡などの共通機器の利用が困難であるが、粘り強く研究体制の整備を進める予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
上皮シートの特性評価の一環として、免疫染色及びqRT-PCRによりⅠ型、Ⅱ型肺胞上皮のマーカーの発現を確認する。また、上皮への侵襲（ウイルス感染など）を非破壊的かつ持続的にモニターするための器材を作成する。
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