| 研究課題/領域番号 |
21H03010
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
有泉 俊一 東京女子医科大学, 医学部, 准教授 (40277158)
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| 研究分担者 |
徳重 克年 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60188729)
岡田 浩介 筑波大学, 医学医療系, 准教授 (80757526)
正田 純一 筑波大学, 医学医療系, 教授 (90241827)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 非アルコール性脂肪性肝疾患 / p62 / 脂質代謝 |
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| 研究実績の概要 |
肝細胞，脂肪細胞，あるいはマクロファージ（肝ではKupffer細胞）にのみp62を特異的に発現する（レスキューされる）組織細胞特異的p62レスキューマウスと全身p62遺伝子欠失マウス（p62-KO）に，60%高脂肪食を4から16週間摂餌させ，NASH重症度を肝病理，血液生化学検査，肝組織のqPCR，immunoblot解析により評価した．この4系統のマウスは，いずれも高脂肪食摂餌によって高度肥満を呈したが，この４系の遺伝子型マウスの間では差は認められなかった．一方，p62-KO，脂肪細胞特異的p62レスキューマウス（p62-A res），マクロファージ特異的p62レスキューマウス（p62-Mres）は，高度の炎症線維化を伴う重症NASHへ進展したが，肝細胞特異的p62レスキューマウス（p62-H res）では，肝炎症，肝線維化が抑制された．血液生化学検査でも，p62-H resではASTおよびALTの上昇が抑制され，qPCRでは，肝炎症および線維化シグナルが抑制された．肝組織の脂肪酸の分画をクロマトグラフィで解析したところ，p62-KOマウスと比較してp62-H resでは，パルミチン酸やオレイン酸の蓄積が軽減しており，肝細胞におけるp62の欠失は，脂肪酸の分画異常を引き起こすことが明らかとなった．
P62をCRISPR/Cas9でノックアウトした培養肝細胞（Hepa1-6細胞）における検討では，palmitic acid添加によってp62とLC3の蓄積が認められ，autophagyが抑制・障害されたが，LC3の蓄積はp62-KO細胞の方が高度であり，p62の欠失がpalmitic acidによって惹起されるautophagy障害を増悪させた．
ヒト肝臓標本を用いた臨床研究では，p62の免疫組織学的発現は，肝炎症および肝線維化の高度な症例で発現が低下していた．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
遺伝子改変動物の実験は，動物の繁殖・供給はほぼ計画通りに進行し，高脂肪食の摂餌も終了している．今後更に解析を行っていく．
細胞実験については，細胞の準備と投与する脂肪酸の準備や条件検討が終了した．
ヒト肝臓標本を用いた研究では，標本の供給や患者情報の収集がほぼ完了した．P62の免疫組織学的解析もほぼ完了しており，今後更に患者情報との相関解析を追加していく．
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| 今後の研究の推進方策 |
遺伝子改変動物の実験は，ほぼ計画通りに進行している．今後も更なる解析を行う．特に，脂質および脂肪酸の代謝や，autophagyに着目し，それらの関与する分子・遺伝子についてqPCRやimmunoblotによる解析を計画している．
細胞実験については，今後細胞外フラックスアナライザーを使用して，p62がミトコンドリア機能やベータ酸化において果たす役割を検討する．
p62に加えて，LC3やmulti-ubiquitinの免疫組織染色解析を計画している．
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