|
近年、骨細胞は骨の恒常性に必須の役割を果たすだけでなく、全身の個体機能維持に関わる多種多様な役割を有する可能性が様々な研究から明らかにされてきた。しかしながら、これまで骨細胞は単一の集団とみなされ、機能的な細分化が行われてこなかったのが現状である。本研究では、我々が新たに作製した骨細胞特異的にCreを発現するマウスを用いることで純度の高い骨細胞の分取が可能となったことから、 定常状態や様々な病態モデルのマウスから得られる骨細胞を用いたシングルセル解析を行う。これにより、骨細胞サブポピュレーションの特定とさらなる新機能の推定、機能的分化に関わる新規因子の同定を可能とし、それらの細胞・成体レベルでの解析から、骨細胞の真の全貌解明を目標とする。
本年度までに、Ai9レポーターマウスと新規骨細胞特異的Cre発現マウスを交配することで、骨細胞のみを特異的にtdTomatoで標識し単離する方法を確立した。さらに、シングルセル解析の標準的な装置である10X Genomics社のChromiumを用いたバーコーディングとライブラリ調整を行い、次世代シーケンス結果をMonocle、Seuratなどにより詳細に解析し、5つの骨細胞サブポピュレーションを特定することに成功した。我々はこれまでに骨細胞の単離法や網羅的なプロテオーム・トランスクリプトーム解析の経験があることから、これまでに集積したデータベースとの比較を行い、特定された各クラスターが骨細胞であることを確認した。
|
