| 研究実績の概要 |
本年度は、CTCFによる転写ドメインの機能解析を目的として、まずCTCFノックイン細胞を樹立した。この細胞では、CTCFのN末端とC末端にそれぞれ異なるタグ配列を融合したものであり、自作したタグ配列に対するリコンビナント抗体を用いてCUT&RUNおよびCUT&TAGの解析をおこなった。また、当初予定していたCTCFなどの既知のクロマチン制御因子に加えて、さらに新規因子の探索をおこなった。リプログラミング課程におけるクロマチン制御機構を明らかにするために、ES細胞を用いてCRISPRゲノムワイドスクリーニングをおこなった。ここでは、クロマチンアクセシビリティを制御する因子を同定するために、ATAC-seeアッセイをスクリーニングの指標として採用し、全マウス遺伝子を一挙にノックアウトすることができるCRISPR lentivirusライブラリーを用いた。その結果、TFDP1, EP400, PARP1などの複数の因子を同定することに成功した。これらのノックアウト細胞をATAC-seqやChIPseqなどの種々の方法により解析することにより、それぞれがクロマチン制御においてどのような役割をになっているのかを解析した。特に、TFDP1のノックアウトは、クロマチンアクセシビリティがゲノムワイドに上昇することから、非常にユニークな機能を有していると考えられた。現在、TFDP1を含んだ転写ドメインの機能解析をすべく、種々のノックイン細胞を調整し、細胞内でのタンパク質複合体の動体を詳細に解析している。
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